GST-MAGE-3蛋白誘導(dǎo)特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該研究通過(guò)RT-PCR從人體胎盤中擴(kuò)增MAGE-3全長(zhǎng)編碼序列,并將其克隆至pGEX-4T-2原核表達(dá)載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL-21.經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)GlutathioneSepharose 4B純化后獲得GST-MAGE-3蛋白.同時(shí)將MAGE-3 cDNA克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1+中,通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染鼠黑色素瘤B16細(xì)胞,構(gòu)建了能表達(dá)人MAGE-3的B16株.在體外,GST-MAGE-3 蛋白沖擊胃癌患者的

2、外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)能誘導(dǎo)特異性CTL殺傷活性.在小鼠體內(nèi),經(jīng)GST-MAGE-3蛋白沖擊的脾細(xì)胞既能誘導(dǎo)出特異性的CTL殺傷活性,活化CD4+ T細(xì)胞,也能激活體液免疫應(yīng)答.第一部分GST-MAG-3原核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá);第二部分GST-MAGE-3蛋白沖擊胃癌病人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)誘導(dǎo)特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答;第三部分人MAGE-3真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá);第四部分GST-MAGE-3蛋白沖擊小鼠脾細(xì)胞誘導(dǎo)特

3、異性抗腫瘤免疫應(yīng)答;結(jié)論:1.正確構(gòu)建了重組原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-2/MAGE-3,測(cè)序結(jié)果正確,并在大腸桿菌中高效表達(dá)了融合蛋白GST-MAGE-3.2.經(jīng)GST-MAGE-3蛋白抗原沖擊的胃癌患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)能在體外有效提呈抗原,激活抗原特異性CTL,誘導(dǎo)特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答.3.成功構(gòu)建了pcDNA3.1+/MAGE-3真核表達(dá)質(zhì)粒,并建立了表達(dá)人MAGE-3 的小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞株.4.經(jīng)GST-MA