GST-MAGE-3蛋白誘導特異性抗腫瘤免疫應答的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該研究通過RT-PCR從人體胎盤中擴增MAGE-3全長編碼序列,并將其克隆至pGEX-4T-2原核表達載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL-21.經(jīng)IPTG誘導表達,表達產(chǎn)物經(jīng)GlutathioneSepharose 4B純化后獲得GST-MAGE-3蛋白.同時將MAGE-3 cDNA克隆至真核表達載體pcDNA3.1+中,通過脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染鼠黑色素瘤B16細胞,構(gòu)建了能表達人MAGE-3的B16株.在體外,GST-MAGE-3 蛋白沖擊胃癌患者的

2、外周血單個核細胞(PBMCs)能誘導特異性CTL殺傷活性.在小鼠體內(nèi),經(jīng)GST-MAGE-3蛋白沖擊的脾細胞既能誘導出特異性的CTL殺傷活性,活化CD4+ T細胞,也能激活體液免疫應答.第一部分GST-MAG-3原核表達載體的構(gòu)建及其表達;第二部分GST-MAGE-3蛋白沖擊胃癌病人外周血單個核細胞(PBMCs)誘導特異性抗腫瘤免疫應答;第三部分人MAGE-3真核表達載體的構(gòu)建與表達;第四部分GST-MAGE-3蛋白沖擊小鼠脾細胞誘導特

3、異性抗腫瘤免疫應答;結(jié)論:1.正確構(gòu)建了重組原核表達質(zhì)粒pGEX-4T-2/MAGE-3,測序結(jié)果正確,并在大腸桿菌中高效表達了融合蛋白GST-MAGE-3.2.經(jīng)GST-MAGE-3蛋白抗原沖擊的胃癌患者外周血單個核細胞(PBMCs)能在體外有效提呈抗原,激活抗原特異性CTL,誘導特異性抗腫瘤免疫應答.3.成功構(gòu)建了pcDNA3.1+/MAGE-3真核表達質(zhì)粒,并建立了表達人MAGE-3 的小鼠B16黑色素瘤細胞株.4.經(jīng)GST-MA

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