TBK-1增強(qiáng)HBcAg核酸疫苗特異性免疫應(yīng)答的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、乙型肝炎(hepatitisB)是由乙型肝炎病毒(hepatitisBvires,HBV)引起的以肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性、壞死為主要病變的高危害性傳染性疾病。慢性HBV感染常常會(huì)導(dǎo)致肝硬化、肝衰竭以及肝細(xì)胞癌的發(fā)生,嚴(yán)重威脅著人類的健康。乙型肝炎慢性化的一個(gè)主要原因是感染者缺乏有效的特異性免疫應(yīng)答,不能清除其體內(nèi)的乙肝病毒。在乙型肝炎的治療領(lǐng)域,目前采用的藥物治療多數(shù)療效并不理想,亟待研究新的治療策略。
　　 DNA疫苗,又稱核酸疫苗或

2、基因疫苗,是隨著基因治療技術(shù)的發(fā)展而產(chǎn)生的一種新型疫苗,不僅具有預(yù)防疾病的作用,同時(shí)還具有治療疾病的應(yīng)用價(jià)值。諸多實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)HBVDNA疫苗能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗原特異性細(xì)胞免疫及體液免疫應(yīng)答,接種后可以誘導(dǎo)多種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生特異性CTL反應(yīng)及產(chǎn)生特異性抗體。但是,DNA疫苗在人體的免疫效果始終不能盡如人意。如何提高HBVDNA疫苗的免疫效果是DNA疫苗研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一,目前采用的研究策略主要是通過聯(lián)合免疫佐劑的方法來增強(qiáng)DNA疫苗的免疫

3、效果,將某些具有增強(qiáng)免疫應(yīng)答的分子基因、蛋白質(zhì)以及其它免疫活性分子聯(lián)合DNA疫苗注入機(jī)體以增強(qiáng)免疫效果,這些分子主要包括共刺激分子、趨化因子、誘導(dǎo)凋亡的分子、Toll樣受體及其配體等。
　　 乙肝核心抗原(HBcAg)能夠在原核生物中穩(wěn)定表達(dá),且保留其固有的免疫原性,是典型的T細(xì)胞非依賴性抗原和T細(xì)胞依賴性抗原,可以在小鼠模型中誘發(fā)強(qiáng)烈的HBcAg特異性的Th細(xì)胞反應(yīng)并產(chǎn)生抗體。近年來有關(guān)固有免疫應(yīng)答的機(jī)制的研究取得了重大的進(jìn)展

4、,TBK-1(TANKbindingkinase-1)是一種TRAF(TNFRassociatingfactor)家族相關(guān)的結(jié)合激酶,活化的TBK-1能夠誘導(dǎo)IRF3的磷酸化以及NF-κB激活,進(jìn)而促進(jìn)IFN-β的產(chǎn)生,是固有免疫應(yīng)答過程中的重要信號(hào)分子。
　　 本研究采用以哺乳動(dòng)物高表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA3.1)為載體的HBcAgDNA疫苗,以BALB/c小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,觀察TBK-1對(duì)HBcAgDNA疫苗誘導(dǎo)小鼠特異性體液免疫

5、和細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響。采用pcDNA3.1(+)作為載體,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pcTBK-1;在體外模擬dsDNA刺激L929細(xì)胞,檢測(cè)TBK-1對(duì)其誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-β的影響;用HBcAg核酸疫苗(pcHBc)單獨(dú)或聯(lián)合質(zhì)粒pdTBK-1免疫BALB/c小鼠,分別在第0,3,6周進(jìn)行免疫,在第8周檢測(cè)特異性抗體,脾臟淋巴細(xì)胞增殖,細(xì)胞因子IFN-γ及IL-4表達(dá)水平以及HBcAg特異性CTL活性等免疫學(xué)指標(biāo)。結(jié)果顯示,dsDNA刺激各組L9

6、29細(xì)胞后,TBK-1轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組相比在mRNA水平及蛋白水平均能顯著增強(qiáng)IFN-β的表達(dá)(P＜0.05)。pcHBc聯(lián)合pcTBK-1免疫小鼠的抗-HBc水平顯著增高(P＜0.05);淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)HBcAg刺激后,其增殖程度明顯高于pcHBc單獨(dú)免疫組(P＜0.05);經(jīng)HBcAg刺激后的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中,聯(lián)合免疫組IFN-γ表達(dá)水平顯著增高(P＜0.05),而IL-4表達(dá)水平無明顯改變(P＞0.05);單獨(dú)pcHBc免疫及聯(lián)

7、合免疫的小鼠中,HBcAg特異性CTL殺傷率均高于對(duì)照組,其中聯(lián)合免疫組小鼠的CTL殺傷率顯著增高(P＜0.05),提示TBK-1能夠增強(qiáng)HBcAg核酸疫苗誘導(dǎo)的特異性體液免疫及細(xì)胞免疫應(yīng)答,并且主要通過Th1型免疫應(yīng)答途徑,初步闡釋了TBK-1作為分子免疫佐劑的作用機(jī)制。
　　 綜上所述,在細(xì)胞模型中,TBK-1在dsDNA刺激作用下,能夠顯著增強(qiáng)下游IFN-β的表達(dá);在小鼠模型中,TBK-1能夠增強(qiáng)HBcAg核酸疫苗誘導(dǎo)的特