HIV-1特異性優(yōu)勢肽段CTL應(yīng)答及HIV-1特異性Th細(xì)胞應(yīng)答研究.pdf

1、人類免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus,HIV）是近20年來獲得性免疫缺陷綜合征（acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS，簡稱為艾滋?。┰谌虼罅餍械母驹?，艾滋病已成為人類主要的致死性疾病之一。目前全球現(xiàn)存HIV感染者和艾滋病患者已達(dá)3320萬人，僅2007年新增感染者達(dá)250余萬，全球每天有6800人感染HIV，同時(shí)有5700人死于艾滋病。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（H

2、AART）雖能降低部分患者病毒含量，重建部分免疫功能，延緩病情發(fā)展，改善癥狀，但是因藥物副作用大、費(fèi)用昂貴、依從性差和產(chǎn)生耐藥等問題不能為大多數(shù)患者完全接受，更為重要的是HAART不能徹底清除病毒。所以研發(fā)安全、有效、廉價(jià)的HIV-1疫苗是目前防治艾滋病病毒傳播流行的首要任務(wù)。大量研究證明細(xì)胞免疫特別是HIV特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）在控制HIV感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用，然而對(duì)于絕大多數(shù)感染者而言，由于缺乏CD4+T細(xì)胞的輔助作用，大

3、量的HIV-1特異性CTL細(xì)胞不能發(fā)揮作用，故而無法完全控制感染。由此可見CD4+T輔助細(xì)胞在中和抗體介導(dǎo)的有效的病毒清除中非常重要，在對(duì)HIV-1特異性CTL細(xì)胞進(jìn)行深入探討的同時(shí)不能忽視對(duì)HIV-1特異性CD4+T細(xì)胞的研究。而有效的HIV-1特異性CTL應(yīng)答不僅由抗原結(jié)構(gòu)決定，同時(shí)受HLA-I類等位基因限制，因此在篩選和鑒定具有強(qiáng)而廣泛作用的HIV-1特異性CTL表位時(shí)，對(duì)表位HLA-I類分子限制性的研究是必不可少的。中國人群HL

4、A-I類等位基因分布明顯不同于其他種族，而HIV-1病毒主要流行株與國外也存在差異，因此決定了中國人群HIV-1特異性CTL應(yīng)答模式的獨(dú)特性。目前對(duì)中國HIV-1感染者特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答和免疫優(yōu)勢特異性CTL應(yīng)答的研究較少，所以在中國人群開展HIV-1特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答和免疫優(yōu)勢CTL應(yīng)答的研究非常必要。
　　本研究以102例HIV-1感染者作為研究對(duì)象，檢測其HLA等位基因分型、病毒載量以及對(duì)覆蓋HIV-1B亞型全基

5、因組序列的413條重疊肽段的特異性CTL應(yīng)答，闡明了中國HIV-1感染者特異性CTL應(yīng)答的免疫優(yōu)勢模式，評(píng)估了其優(yōu)勢肽段特異性CTL應(yīng)答同病毒載量的相關(guān)性；同時(shí)應(yīng)用ELISpot法檢測14名HIV-1感染者對(duì)覆蓋HIV-1B亞型Gag和Nef蛋白序列的94條重疊肽段特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答，分析了中國人群HIV-1感染者HIV-1特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答特征，確定免疫優(yōu)勢應(yīng)答區(qū)域，為研發(fā)針對(duì)中國人群的安全有效的HIV-1/AIDS疫苗提

6、供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　1.用PCR-SSP（系列特異性引物-PCR）技術(shù)鑒定納入研究的102例HIV-1感染者/AIDS患者的HLA-I類等位基因分型，發(fā)現(xiàn)10個(gè)HLA-I類基因A*02，A*24，A*11，B*13，B*46，B*15，Cw*03，Cw*01，Cw*07和Cw*06在研究人群分布頻率大于20％，而國外研究發(fā)現(xiàn)的同HIV疾病緩慢進(jìn)展相關(guān)的等位基因B*27和B*57在我們研究中分布頻率

7、較低，均小于3％。上述結(jié)果同先前的研究一致，符合中國人群HLA-I類等位基因的分布規(guī)律。
　　2.應(yīng)用ELISpot法研究了102名HIV-1感染者對(duì)覆蓋HIV-1B亞型全基因組序列的413條重疊肽段的特異性CTL應(yīng)答，其中165條覆蓋了研究對(duì)象各自HLA-I類等位基因限制的CTL優(yōu)勢表位（依據(jù)LosAlamosNationalLaboratory公布表位），評(píng)估了HIV-1感染者HLA-I類等位基因的免疫優(yōu)勢模式。
　　3

8、.比較了慢性感染者和艾滋病患者HLA-I類等位基因限制的優(yōu)勢肽段識(shí)別率的差異。HLA-A*2，-A*24，-B*07，-B*15和-B*58限制的優(yōu)勢肽段在慢性感染者中平均識(shí)別頻率較艾滋病患者中平均識(shí)別頻率高（P=0.017，P=0.041，P=0.004，P=0.005，P=0.042），而對(duì)于HLA-A*11限制的優(yōu)勢肽段在兩組中的識(shí)別頻率與上述結(jié)果相反（P=0.020）。慢性感染者HLA-A和-B等位基因限制的優(yōu)勢肽段特異性CTL

9、應(yīng)答占總應(yīng)答的比例同病毒載量之間沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的關(guān)聯(lián)（r=0.014，P=0.923）。而艾滋病患者HLA-A和-B等位基因限制的優(yōu)勢肽段特異性CTL應(yīng)答占總應(yīng)答的比例同病毒載量之間存在著負(fù)相關(guān)（r=-0.321，P=0.026），上述數(shù)據(jù)表明HLA-I類等位基因限制的優(yōu)勢CTL應(yīng)答在終末期感染中發(fā)揮著控制病情進(jìn)展的重要作用。
　　4.通過ELISpot法檢測了14名HIV-1感染者針對(duì)Gag和Nef蛋白的特異性CD4+T細(xì)

10、胞應(yīng)答的廣泛性和特異性。不論研究對(duì)象是否接受治療，處于不同疾病階段的對(duì)象都能對(duì)Gagp17，p24，p15和Nef蛋白產(chǎn)生HIV-1特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答；CD4+T細(xì)胞應(yīng)答強(qiáng)度和應(yīng)答幅度同病毒載量之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的相關(guān)性（P>0.05）；確定了17個(gè)應(yīng)答頻率高于20％，標(biāo)準(zhǔn)化CD4+T細(xì)胞應(yīng)答大于50SFC/106CD4+T細(xì)胞的免疫優(yōu)勢區(qū)。將9名研究對(duì)象的Gag和Nef蛋白特異性CTL應(yīng)答同CD4+T細(xì)胞應(yīng)答比較發(fā)現(xiàn)77.78％

11、（7/9）對(duì)象的CD4+T細(xì)胞應(yīng)答強(qiáng)度和幅度要高于其CTL應(yīng)答。
　　綜上所述，本研究總結(jié)了中國HIV-1感染者的HLA-I類等位基因分布規(guī)律，評(píng)估了HIV-1特異性CTL應(yīng)答的免疫優(yōu)勢模式，比較了特異性HLA-I類等位基因同HIV-1疾病進(jìn)展的關(guān)系，表明即使在感染終末期，HLA-A和-B類等位基因限制的優(yōu)勢CTL應(yīng)答依然發(fā)揮了重要的延緩疾病進(jìn)展的作用；中國人群HIV-1感染者特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答模式同國外人群特異性CD4+T