HIV-1特異性優(yōu)勢肽段CTL應答及HIV-1特異性Th細胞應答研究.pdf

1、人類免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus,HIV）是近20年來獲得性免疫缺陷綜合征（acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS，簡稱為艾滋?。┰谌虼罅餍械母驹颍滩∫殉蔀槿祟愔饕闹滤佬约膊≈?。目前全球現(xiàn)存HIV感染者和艾滋病患者已達3320萬人，僅2007年新增感染者達250余萬，全球每天有6800人感染HIV，同時有5700人死于艾滋病。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（H

2、AART）雖能降低部分患者病毒含量，重建部分免疫功能，延緩病情發(fā)展，改善癥狀，但是因藥物副作用大、費用昂貴、依從性差和產(chǎn)生耐藥等問題不能為大多數(shù)患者完全接受，更為重要的是HAART不能徹底清除病毒。所以研發(fā)安全、有效、廉價的HIV-1疫苗是目前防治艾滋病病毒傳播流行的首要任務。大量研究證明細胞免疫特別是HIV特異性細胞毒性T淋巴細胞（CTL）在控制HIV感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用，然而對于絕大多數(shù)感染者而言，由于缺乏CD4+T細胞的輔助作用，大

3、量的HIV-1特異性CTL細胞不能發(fā)揮作用，故而無法完全控制感染。由此可見CD4+T輔助細胞在中和抗體介導的有效的病毒清除中非常重要，在對HIV-1特異性CTL細胞進行深入探討的同時不能忽視對HIV-1特異性CD4+T細胞的研究。而有效的HIV-1特異性CTL應答不僅由抗原結(jié)構(gòu)決定，同時受HLA-I類等位基因限制，因此在篩選和鑒定具有強而廣泛作用的HIV-1特異性CTL表位時，對表位HLA-I類分子限制性的研究是必不可少的。中國人群HL

4、A-I類等位基因分布明顯不同于其他種族，而HIV-1病毒主要流行株與國外也存在差異，因此決定了中國人群HIV-1特異性CTL應答模式的獨特性。目前對中國HIV-1感染者特異性CD4+T細胞應答和免疫優(yōu)勢特異性CTL應答的研究較少，所以在中國人群開展HIV-1特異性CD4+T細胞應答和免疫優(yōu)勢CTL應答的研究非常必要。
　　本研究以102例HIV-1感染者作為研究對象，檢測其HLA等位基因分型、病毒載量以及對覆蓋HIV-1B亞型全基

5、因組序列的413條重疊肽段的特異性CTL應答，闡明了中國HIV-1感染者特異性CTL應答的免疫優(yōu)勢模式，評估了其優(yōu)勢肽段特異性CTL應答同病毒載量的相關(guān)性；同時應用ELISpot法檢測14名HIV-1感染者對覆蓋HIV-1B亞型Gag和Nef蛋白序列的94條重疊肽段特異性CD4+T細胞應答，分析了中國人群HIV-1感染者HIV-1特異性CD4+T細胞應答特征，確定免疫優(yōu)勢應答區(qū)域，為研發(fā)針對中國人群的安全有效的HIV-1/AIDS疫苗提

6、供實驗依據(jù)。
　　主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　1.用PCR-SSP（系列特異性引物-PCR）技術(shù)鑒定納入研究的102例HIV-1感染者/AIDS患者的HLA-I類等位基因分型，發(fā)現(xiàn)10個HLA-I類基因A*02，A*24，A*11，B*13，B*46，B*15，Cw*03，Cw*01，Cw*07和Cw*06在研究人群分布頻率大于20％，而國外研究發(fā)現(xiàn)的同HIV疾病緩慢進展相關(guān)的等位基因B*27和B*57在我們研究中分布頻率

7、較低，均小于3％。上述結(jié)果同先前的研究一致，符合中國人群HLA-I類等位基因的分布規(guī)律。
　　2.應用ELISpot法研究了102名HIV-1感染者對覆蓋HIV-1B亞型全基因組序列的413條重疊肽段的特異性CTL應答，其中165條覆蓋了研究對象各自HLA-I類等位基因限制的CTL優(yōu)勢表位（依據(jù)LosAlamosNationalLaboratory公布表位），評估了HIV-1感染者HLA-I類等位基因的免疫優(yōu)勢模式。
　　3

8、.比較了慢性感染者和艾滋病患者HLA-I類等位基因限制的優(yōu)勢肽段識別率的差異。HLA-A*2，-A*24，-B*07，-B*15和-B*58限制的優(yōu)勢肽段在慢性感染者中平均識別頻率較艾滋病患者中平均識別頻率高（P=0.017，P=0.041，P=0.004，P=0.005，P=0.042），而對于HLA-A*11限制的優(yōu)勢肽段在兩組中的識別頻率與上述結(jié)果相反（P=0.020）。慢性感染者HLA-A和-B等位基因限制的優(yōu)勢肽段特異性CTL

9、應答占總應答的比例同病毒載量之間沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義的關(guān)聯(lián)（r=0.014，P=0.923）。而艾滋病患者HLA-A和-B等位基因限制的優(yōu)勢肽段特異性CTL應答占總應答的比例同病毒載量之間存在著負相關(guān)（r=-0.321，P=0.026），上述數(shù)據(jù)表明HLA-I類等位基因限制的優(yōu)勢CTL應答在終末期感染中發(fā)揮著控制病情進展的重要作用。
　　4.通過ELISpot法檢測了14名HIV-1感染者針對Gag和Nef蛋白的特異性CD4+T細

10、胞應答的廣泛性和特異性。不論研究對象是否接受治療，處于不同疾病階段的對象都能對Gagp17，p24，p15和Nef蛋白產(chǎn)生HIV-1特異性CD4+T細胞應答；CD4+T細胞應答強度和應答幅度同病毒載量之間均無統(tǒng)計學意義的相關(guān)性（P>0.05）；確定了17個應答頻率高于20％，標準化CD4+T細胞應答大于50SFC/106CD4+T細胞的免疫優(yōu)勢區(qū)。將9名研究對象的Gag和Nef蛋白特異性CTL應答同CD4+T細胞應答比較發(fā)現(xiàn)77.78％

11、（7/9）對象的CD4+T細胞應答強度和幅度要高于其CTL應答。
　　綜上所述，本研究總結(jié)了中國HIV-1感染者的HLA-I類等位基因分布規(guī)律，評估了HIV-1特異性CTL應答的免疫優(yōu)勢模式，比較了特異性HLA-I類等位基因同HIV-1疾病進展的關(guān)系，表明即使在感染終末期，HLA-A和-B類等位基因限制的優(yōu)勢CTL應答依然發(fā)揮了重要的延緩疾病進展的作用；中國人群HIV-1感染者特異性CD4+T細胞應答模式同國外人群特異性CD4+T