CRT促進(jìn)DC疫苗抗腫瘤特異性免疫應(yīng)答研究.pdf

1、目的：鈣網(wǎng)蛋白（Calreticulin，CRT）是哺乳動(dòng)物體內(nèi)一種高度保守、分子量大小為46 kDa的Ca2+結(jié)合蛋白。蒽環(huán)類化學(xué)藥物誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡，伴隨CRT膜外側(cè)向移動(dòng)定位，誘使吞噬細(xì)胞主動(dòng)清除凋亡的腫瘤細(xì)胞，本課題的研究目的即探討CRT提高致敏DC的抗原呈遞能力，誘導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤特異性免疫應(yīng)答的可能機(jī)制。為DC疫苗的研究提供一種新的思路。
　　方法：(1)用PCR技術(shù)克隆CRT基因和MUC1基因，分別構(gòu)建過(guò)表達(dá)質(zhì)粒載體p

2、HBAd-U6-CMV-MUC1/CRT和pHBAd-U6-CMV-MUC1。(2)重組腺病毒載體pHBAd-U6-CMV-MUC1/CRT和pHBAd-U6-CMV-MUC1的包裝，收毒及擴(kuò)增。(3)小鼠原代樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic Celll，DC）的提取及其特異性表面分子的檢測(cè)。(4)小鼠T淋巴細(xì)胞的提取。(5)腺病毒感染的原代DC細(xì)胞刺激T淋巴細(xì)胞活化的情況。
　　結(jié)果：(1)成功構(gòu)建pHBAd-U6-CMV-MUC

3、1/CRT和pHBAd-U6-CMV-MUC1。(2)成功包裝，擴(kuò)增腺病毒載體pHBAd-U6-CMV-MUC1/CRT和pHBAd-U6-CMV-MUC1。(3)成功提取小鼠原代DC細(xì)胞。(4)證實(shí)腺病毒感染的原代DC可以有效刺激T淋巴細(xì)胞的活化。
　　結(jié)論：利用腺病毒向胞內(nèi)遞送MUC1-CRT致敏DC，通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)CRT-MUC1可成功致敏DC，并提高了機(jī)體誘導(dǎo)產(chǎn)生抗腫瘤特異性免疫應(yīng)答的能力，為抗腫瘤DC疫苗的研制提供