特異性艾滋病核酸疫苗轉(zhuǎn)導(dǎo)載體的構(gòu)建及初步應(yīng)用.pdf

1、當(dāng)下，在全世界對(duì)控制和預(yù)防艾滋病病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）感染工作中尚無(wú)完全有效手段的前提下，要有效的預(yù)防并控制艾滋病病毒的感染，最佳的思路是開發(fā)出一種能夠安全、有效的預(yù)防艾滋病病毒感染的疫苗。
　　本研究的目的是構(gòu)建一種新型的具有特異性的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)載體TG蛋白?；诖┠る男盘?hào)肽（TAT）、DNA識(shí)別及結(jié)合序列系統(tǒng)（GAL4/UAS）上，添加適當(dāng)?shù)募兓拌b定標(biāo)簽His-tag，定向克隆得

2、到編碼TG蛋白的基因片段。以原核表達(dá)系統(tǒng)中的pET-28a為載體構(gòu)建了并得到了原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET-TG。GAL4蛋白具有能夠與UAS核苷酸序列特異性結(jié)合的能力，所以經(jīng)過純化的TG蛋白在一定條件下可在機(jī)體外與嵌入熒光蛋白基因EGFP片段的pVAX1-UAS-EGFP質(zhì)粒特異性結(jié)合，然后再利用瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)就可以直觀的證明TG蛋白可與
　　pVAX1-UAS-EGFP質(zhì)粒特異性結(jié)合。再摸索出TG蛋白與pVAX1-UAS-EGF

3、P質(zhì)粒結(jié)合活性最高時(shí)的質(zhì)粒蛋白濃度和時(shí)間條件。在細(xì)胞水平上將蛋白與質(zhì)粒特異性的結(jié)合物產(chǎn)物與293T細(xì)胞共浴，最后在熒光顯微鏡下通過對(duì)熒光的檢測(cè)研究TG蛋白的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)活性。
　　通過大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)分子量為21kDa的目的蛋白。通過瓊脂糖凝膠電泳可以看出質(zhì)粒與蛋白結(jié)合活性最強(qiáng)時(shí)質(zhì)粒量為10g，蛋白量為16g，同時(shí)TG蛋白在10min內(nèi)即可與pVAX1-UAS-EGFP結(jié)合，2h內(nèi)其結(jié)合效率無(wú)明顯變化。通過細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)現(xiàn)pVAX1-