豬骨骼肌特異性表達載體的構建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為提高轉基因豬的生產(chǎn)水平，使外源基因能夠在豬骨骼肌特異高效地表達，必須構建一個特異高效表達的表達載體，其中啟動子的選擇非常重要。我們首先改造了無啟動子的紅色熒光蛋白載體，添加了增強子，IRES等元件以滿足分析需要，然后分析豬α actin，CKM，CAPN 3、CA 3、TNNI 2、CASQ 1、GEM等7種骨骼肌特異性表達基因5′調(diào)控區(qū)的轉錄因子結合位點，確定需要克隆的區(qū)間，經(jīng)PCR獲得目的啟動子片段，酶切連入無啟動子的報告基因載體

2、中，瞬時轉染成肌細胞并誘導分化，同時轉染其他組織來源的細胞為對照，包括心肌細胞，腎細胞，內(nèi)皮細胞，成纖維細胞，肝細胞。本研究結果如下：
　　 ⑴Α actin，CKM，CAPN 3的啟動子僅在誘導分化的肌細胞中有啟動活性，在其他來源的細胞中無啟動活性。
　　 ⑵其他豬骨骼肌特異性基因的啟動子在骨骼肌中未檢測到啟動活性，在其他組織來源的細胞中也未檢測到啟動活性。
　　 ⑶GEM啟動子在多種組織來源的細胞中均有啟動活

3、性。
　　 ⑷得到三種豬骨骼肌特異性表達載體：CMV Enhancer-α actinPromoter-pIRES-DsRed，CMV Enhancer-CKM Promoter-pIRES-DsRed，CMV Enhancer-CAPN3 Promoter-pIRES-DsRed。
　　 ⑸得到了一種廣泛性表達的啟動子：CMV Enhancer-CKM Promoter-pIRES-DsRed。骨骼肌特異性表達載體僅在

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