綿羊骨骼肌特異表達miRNA前體多態(tài)及其表達分析.pdf

1、提高綿羊的產(chǎn)肉性能在綿羊養(yǎng)殖業(yè)中具有重要的生產(chǎn)意義。據(jù)研究表明，miRNA在骨骼肌發(fā)育過程中起到重要的調(diào)控作用。而 miR-1,miR-133和 miR-206三種 miRNA在骨骼肌和心肌中特異表達，與肌肉發(fā)育息息相關(guān)。
　　鑒于此，本論文以 miR-1,miR-133和 miR-206及其前體為研究對象，從以下幾個方面探究其在綿羊骨骼肌發(fā)育中的表達規(guī)律及生物學(xué)作用：
　　1.采集發(fā)育時間為45天、65天、85天、105天

2、和125天的綿羊胚胎，提取后肢骨骼肌樣品并提取 RNA，利用熒光定量 PCR技術(shù)研究 miR-1,miR-133和 miR-206在綿羊胚胎階段的不同時期以及成年后的表達規(guī)律。
　　2.采用 PCR-SSCP及測序檢測 miR-1,miR-133和 miR-206前體序列在不同產(chǎn)肉性能的四個綿羊品種（特克賽爾羊、阿勒泰羊、中國美利奴羊和湖羊）中的多態(tài)性，發(fā)現(xiàn) m iR-133前體 g.54047535位點存在一個 A>G突變，該位

3、點存在 AA、AG、GG三種基因型。并對該突變位點在不同品種綿羊群體中的基因頻率進行生物統(tǒng)計學(xué)分析，證明該位點 G等位基因頻率在特克賽爾羊群體中遠(yuǎn)高于 A等位基因，其差異顯著。二級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析表明該突變可以提高 miR-133前體基因二級結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。
　　3.將包含該突變位點的 miR-133前體基因序列構(gòu)建表達載體，轉(zhuǎn)入 Hela細(xì)胞，在細(xì)胞水平驗證其前體序列的改變對 miRNA成熟加工的影響。實驗證明包含 GG基因型的基因片