牛乳腺特異性表達(dá)人溶菌酶基因載體構(gòu)建與表達(dá)檢測(cè).pdf_第1頁(yè)
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1、亞熱帶地區(qū)氣候炎熱，奶牛易發(fā)乳房炎，本文構(gòu)建了奶牛乳腺特異性表達(dá)人溶菌酶(hLZ)基因的載體并在乳腺細(xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證。參照hLZ基因序列(GenBank:NM_000239.2)設(shè)計(jì)引物，采用RT-PCR的方法從人胎盤組織中成功擴(kuò)增克隆了長(zhǎng)406bp的hLZ基因成熟肽片段。應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室已有的娟姍牛乳腺特異性表達(dá)調(diào)控元件，經(jīng)過(guò)多步酶切-連接-轉(zhuǎn)化-篩選-鑒定，構(gòu)建了奶牛乳腺表達(dá)hLZ的載體pBCN5.2-hLZ-I.I-EGFP-neo(13.

2、6kb)和pBCN-3.8-hLZ-1.1-EGFP-neo(12.2kb)，經(jīng)過(guò)酶切、PCR和測(cè)序驗(yàn)證載體構(gòu)建正確。將構(gòu)建的2個(gè)載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Bcap細(xì)胞，24h后可以觀察到EGFP表達(dá)的細(xì)胞，然后純化細(xì)胞總RNA，通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)比較hLZ的表達(dá)豐度，結(jié)果顯示，pBCN5.2-hLZ-1.1-EGFP-neo載體相對(duì)表達(dá)量為0.89±0.04，pBCN-3.8-hLZ-1.1-EGFP-neo為0.62±0.05，前者表達(dá)效率較

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