雞組織特異性表達載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)基因研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、與哺乳動物乳腺生物反應(yīng)器一樣,雞輸卵管生物反應(yīng)器在生物制藥以及農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景.該實驗對雞輸卵管組織特性表達載體的構(gòu)建、轉(zhuǎn)基因整合及表達的檢測進行了研究.1.核基質(zhì)附著區(qū)(MARs)和長末端重復(fù)序列(LTR)在真核生物的生命活動中具有極其重要的生物功能.MARs能形成相對獨立的結(jié)構(gòu)功能單位,調(diào)節(jié)基因的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和表達;LTR不但提供了整合所必須的末端,而且提供了轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后處理的信號.為了在禽類轉(zhuǎn)基因技術(shù)上研究上核基質(zhì)附著

2、區(qū)(MARs)與長末端重復(fù)序列(LTR)對外源基因的整合與表達的調(diào)控作用,構(gòu)建了以下真核表達載體:(1)將MARs接入載體pEGFP-N1的CMV IE上游,得到中間載體pEGFP-MARs,然后再將LTR分別接入中間載體pEGFP-MARs的MARs序列上游與SV40-polyA下游形成真核表達載體載體pEDLM;(2)將MARs接入載體pOVALG的Oval-promotor上游,得到中間載體pOVALG-MARs,再將LTR分別接

3、入中間載體pOVALG-MARs序列上游與SV40-polyA下游形成真核表達載體pEODLM.2.將用Lipofectin包裝好的質(zhì)粒pEGFP-N1、pEDLM、pEOVALG、pEODLM注入白來航雞X期胚盤,并敷以G418篩選,分別對8-12日齡、13-22日齡的死胚和孵出的小雞中用PCR和Southern的方法對外源基因的整合進行檢測,結(jié)果證明LTR和MARs對于外源基因的整合率的提高是有效的;用RT-PCR的方法對外源基因的

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