小麥花粉特異性基因TaPSG719真核熒光表達載體的構建和亞細胞定位.pdf

1、小麥是世界上最重要的作物之一。盡管配子體發(fā)育的分子生物學研究在雜交育種方面具有深遠的意義,但目前對它的研究很少。小麥花粉特異性基因TaPSG719在開花的前5天開始表達,表達量在花粉發(fā)育的中期迅速增長,在開花的前4天達到最大值,在花粉成熟后表達量迅速下降。雖然生物信息數(shù)據(jù)庫中已有其mRNA序列,但是有關該基因編碼蛋白的結構、功能及細胞定位目前仍不清楚。
　　本論文構建了真核熒光表達載體pAct1Is-mut-GFP-TaPSG71

2、9,為TaPSG719基因在真核細胞中的表達提供了基礎,并對該基因表達產(chǎn)物進行了細胞定位。用pAct1Is-mut-GFP作為載體,構建TaPSG719基因的真核熒光表達載體,并成功的將pAct1Is-mut-GFP-TaPSG719載體在洋蔥表皮細胞中獲得瞬時表達,驗證了所構建的真核熒光表達載體在真核細胞中表達的可行性。在經(jīng)過基因槍轉化的洋蔥表皮細胞中,只能在其細胞壁上看到綠色熒光,推測TaPSG719基因只在細胞壁中表達,可能與細胞

3、壁的形成有關。
　　在載體構建過程中,摸索了載體構建過程中的條件,豐富了載體構建過程中的實驗參數(shù),提高了實驗的成功率。在TaPSG719基因的兩端分別引入了AccI和NcoI酶切位點,并且把TaPSG719基因中間的AccI和NcoI兩個酶切位點運用Overlap-PCR的方法進行了突變。在真核細胞中大量表達TaPSG719蛋白,可以為研究該蛋白的高級結構,進而有望闡明蛋白功能的機制提供材料。這些工作都為將來更為深入的研究TaPS