雞輸卵管組織特異性基因打靶載體的構建及誘導雞免疫耐受模型的建立.pdf

1、二十多年來，用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)藥物蛋白已經(jīng)取得了突破性進展，具有廣闊的應用前景。與哺乳動物相比，禽類具有個體小，繁殖率高，世代間隔短，蛋中可以獲得目的基因產(chǎn)物等優(yōu)勢。但是由于禽類的獨特的生殖生理特點，雞輸卵管生物反應器的開發(fā)相對落后。本研究首先構建了雞輸卵管組織特異性基因打靶載體和分泌型融合表達載體，將后者轉(zhuǎn)染雞法氏囊淋巴細胞(DT40)系，篩選得到了可穩(wěn)定表達并分泌人Leptin和GFP的細胞，為轉(zhuǎn)基因雞的研究和輸卵管生物反應器的制備奠

2、定了基礎。同時，為了解決外源基因產(chǎn)物引起宿主免疫應答的問題，本文通過在雞胚發(fā)育早期的不同階段，采用胚胎血管微注射和卵黃注射兩種方式，將外源蛋白抗原引入雞胚，誘導了出生后小雞對同種抗原的免疫耐受，獲得了完全免疫耐受和部分免疫耐受的個體。結(jié)果表明，構建的卵清蛋白基因打靶載體和分泌型融合表達載體為轉(zhuǎn)基因雞的研究提供了上游元件；可穩(wěn)定表達并分泌人Leptin和GFP的細胞系，為利用雞核移植法和嵌合體法制備輸卵管生物反應器奠定了基礎；誘導雞免疫耐