半相合腫瘤特異性淋巴細(xì)胞過繼免疫治療腫瘤的小鼠模型研究.pdf

1、生物治療已經(jīng)成為繼手術(shù)、放療、化療后的第4種抗癌療法。其中細(xì)胞過繼免疫治療是腫瘤的生物治療的主要手段之一。治療所采用的細(xì)胞通常來源于患者自體細(xì)胞。由于腫瘤患者一般處于免疫低功狀態(tài),有些患者很難誘導(dǎo)出較強(qiáng)的和足量的抗腫瘤免疫活性細(xì)胞。若采用MHC完全匹配的供者免疫細(xì)胞作過繼免疫治療比較理想,但供者難求。如采用MHC不相合異體免疫細(xì)胞可能會(huì)產(chǎn)生移植物抗宿主反應(yīng),也無法誘導(dǎo)針對(duì)宿主腫瘤特異性的細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)。而父母和子女之間半相合的

2、供者較易尋找。供者免疫細(xì)胞有可能通過與患者M(jìn)HC相合部分誘導(dǎo)產(chǎn)生腫瘤抗原特異性CTL；而不相合部分產(chǎn)生免疫佐劑效應(yīng)。但應(yīng)用半相合CTL進(jìn)行過繼免疫治療尚缺乏深入研究。
　　 目的:研究MHC半相合腫瘤特異性CTL過繼免疫治療腫瘤的效應(yīng)和機(jī)制。探索細(xì)胞過繼免疫治療腫瘤的新途徑。
　　 方法:應(yīng)用TC-1腫瘤細(xì)胞裂解物沖擊C57BL/6與Balb/C的雜交一代(F1)小鼠骨髓來源的樹突細(xì)胞(TP-DC),再與小鼠脾細(xì)胞混合培

3、養(yǎng),誘導(dǎo)腫瘤特異性CTL(TP-DC-TC)；C57BL/6(C57)荷瘤鼠以TC-1腫瘤細(xì)胞的皮下成瘤為動(dòng)物治療模型,當(dāng)腫瘤直徑約為5毫米時(shí),經(jīng)尾靜脈回輸絲裂霉素C滅活TP-DC-TC予以治療?；蛴媒z裂霉素C滅活的C57小鼠來源的TC-1腫瘤細(xì)胞直接免疫F1小鼠獲得腫瘤特異性CTL。進(jìn)而將CTL經(jīng)絲裂霉素C滅活后經(jīng)尾靜脈輸入C57小鼠TC-1腫瘤細(xì)胞人工肺轉(zhuǎn)移模型。兩個(gè)動(dòng)物模型分別治療3次,每次間隔5～7天,觀察腫瘤大小和生存期。人工

4、肺轉(zhuǎn)移模型的小鼠末次治療后5天,眼眶采血,用ELISA檢測血漿IL-2、IL-10、IFN-γ、TGF-β水平；用流式細(xì)胞術(shù)檢測脾細(xì)胞和外周血細(xì)胞中CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、Treg、MDSC、NK等免疫細(xì)胞亞群的變化和宿主免疫效應(yīng)細(xì)胞的H-2表型。組織切片檢測半相合CTL治療對(duì)心、肝、腎、脾的影響。
　　 結(jié)果: ELISPOT結(jié)果顯示體外或體內(nèi)均可誘導(dǎo)半相合腫瘤特異性CTL。應(yīng)用該細(xì)胞治療皮下荷TC-1腫瘤的C

5、57小鼠,其腫瘤生長速度減緩,生存延長。在人工肺轉(zhuǎn)移C57小鼠模型中與同系小鼠CTL過繼免疫治療相比,滅活半相合CTL免疫治療后小鼠肺表面腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)量明顯減少,小鼠的生存期顯著延長。半相合CTL治療顯著上調(diào)了Th1細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ的分泌,并下調(diào)免疫抑制因子TGF-β和IL-10產(chǎn)生。流式儀檢測證明:半相合CTL治療后CD4+T、CD8+T和NK細(xì)胞在外周血和脾細(xì)胞中的比例明顯增高；并且誘導(dǎo)了宿主自身腫瘤特異性CTL和NK細(xì)胞