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文檔簡介
1、糖基化修飾在生物體內具有極大的普遍性和重要性,糖基化修飾的蛋白占細胞內蛋白總量超過了70%,蛋白表面的糖鏈修飾與其結構、功能等均存在密切的關系。在以前的糖生物學研究中,較多的關注于蛋白整體的糖基化水平,而對于蛋白特異性的糖基化修飾關注的較少。目前,越來越多的研究顯示,在生物學進程中,特定蛋白上的特異性糖基化比整體水平的糖基化更具有生物學意義。然而,如何能夠直接在細胞水平標記特定蛋白的特異性糖基化修飾的技術手段還有待不斷地開發(fā)。因為這存在
2、兩大難點:1、相比于磷酸化、乙?;鹊鞍追g后修飾,糖基化修飾的糖鏈結構更加的復雜;2、糖鏈的低免疫原性限制了針對特定位點糖基化修飾的高效抗體的開發(fā)。為了進一步克服這些限制,我們利用代謝標記和鄰位連接技術聯合應用(METPLA)的策略來標記和影像特定蛋白的特異性糖基化修飾。這個策略中,糖鏈和靶標蛋白分別被連接上兩條寡核苷酸,當這兩條寡核苷酸的距離<40nm時,兩者之間發(fā)生滾環(huán)復制反應,最終使標記的熒光達到在顯微鏡下可見的量,從而影像特定
3、蛋白上的特異性糖基化修飾。我們利用該策略提供了一種新的方法,能夠直接在細胞水平對各種不同類型的糖基化進行影像,并且在細胞動態(tài)變化過程中檢測一些細胞膜受體蛋白的二聚體狀態(tài)。
利用機體的免疫系統去靶向和清除腫瘤細胞具有特異性和高效性,是一種理想的治療策略。該策略通過招募人血清中天然存在的抗體到腫瘤細胞表面,從而引起補體依賴的細胞毒性(CDC)、抗體依賴的細胞毒性(ADCC)或抗體依賴的細胞吞噬(ADCP)去清除腫瘤細胞。但是這種傳
4、統的方法存在一些固有的缺陷:相比于共價結合的方式,配體-受體的非共價結合方式相對較弱并且不穩(wěn)定;另外,腫瘤細胞表面本身的受體數量是有限的,這會導致受體-配體的結合達到飽和而導致靶向性的降低;最后,配體-受體的結合,可能會誘導細胞對結合在其表面的分子進行內吞作用,也將導致免疫應答效率的下降。對此,我們提出了一種新型的策略,聯合糖代謝工程和雙正交化學反應,通過控制糖鏈代謝的量,從而控制在腫瘤細胞表面帶上的鼠李糖(Rha)表位的量。腫瘤細胞表
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