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文檔簡介
1、目的:
本研究為了探討miR-146a在變應性鼻炎特異性免疫治療中所發(fā)揮的作用及其相關作用機制,對其在變應性鼻炎患者鼻黏膜中的表達情況進行檢測,隨后通過建立變應性鼻炎小鼠模型并研究進行特異性免疫治療時該小鼠模型中的miR-146a所發(fā)揮的作用,旨在為尋找新的特異性免疫增效因子并將之應用于臨床提供實驗依據(jù)。
方法:
(1)熒光定量PCR法檢測變應性患者以及非變應性鼻炎人群鼻黏膜中miR-146amRNA的表達
2、。
(2)基礎致敏階段:以BALB/c小鼠為對象,依照50μg卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)、5 mg氫氧化鋁凝膠為佐劑,加入1 mL滅菌生理鹽水配制成懸濁液,隨后對BALB/c小鼠進行腹腔注射,注射時間為隔日1次,總共注射7次;強化致敏階段:將小鼠進行基礎致敏之后,用5%OVA滅菌生理鹽水溶液對各組實驗小鼠進行滴鼻,每側用量為10μL,頻率為每日1次,以此進行鼻腔激發(fā),對AR模型組分別連續(xù)激發(fā)10天、20天,對照組小
3、鼠依照上述相同方法用0.9%滅菌生理鹽水進行腹腔注射,隨后再用0.9%滅菌生理鹽水進行滴鼻。酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測各組小鼠外周血OVA-sIgE含量,HE染色法觀察各組小鼠鼻黏膜組織形態(tài)學變化情況,用熒光定量PCR檢測各組小鼠鼻黏膜中miR-146amRNA的表達情況。
(3)分別用OVA(NPVO)、miR-146a(NPVm)和OVA+miR-146a(NPVom)納米顆粒疫苗作用于變應性鼻炎小鼠模型,觀察進行上述操
4、作后小鼠癥狀和相關指標的的變化情況。
結果:
(1)miR-146a在變應性鼻炎患者鼻黏膜組織中的相對表達量明顯低于非變應性鼻炎患者鼻黏膜組織(P<0.01);
(2)造模結束后對小鼠鼻黏膜觀察結果表明,AR模型組小鼠均具有典型的變應性鼻炎臨床癥狀,其鼻黏膜上皮結構紊亂,炎性細胞浸潤明顯,纖毛部分融合甚至脫落;血清OVA-sIgE的濃度明顯高于對照組(P<0.05),miR-146a在AR模型組小鼠的鼻黏膜
5、組織中的相對表達量明顯低于正常鼻黏膜組織(P<0.01)。
(3) NPVo組小鼠的變應性鼻炎癥狀明顯加重;NPVm處理組小鼠的變應性鼻炎相關反應無顯著變化;NPVom處理組小鼠對變影響鼻炎相關反應表現(xiàn)出了明顯的抑制作用;ELISA檢測結果表明,各組小鼠的血清以及鼻黏膜中的sIgE以及IL-4水平亦明顯增高;流式細胞術檢測結果發(fā)現(xiàn),OVA特異性抗原調節(jié)性T細胞的增殖活性顯著上升;各組AR模型小鼠鼻黏膜以及脾臟中調節(jié)性T細胞的增
6、殖活性明顯低于正常對照組;分別用NPVo和NPVm處理的AR小鼠,其調節(jié)性T細胞增殖活性并未發(fā)生明顯變化,而當用NPVom作用小鼠后,該組小鼠的T細胞增殖活性發(fā)生明顯增高;進一步分析發(fā)現(xiàn),NPVom處理組小鼠的調節(jié)性T細胞具有OVA特異性;NPVm或者NPVom作用小鼠后,能夠使DCs中TGF-βmRNA及其相應蛋白的表達顯著增高;用na(i)ve CD4+T細胞與NPV致敏的DCs進行共培養(yǎng),結果表明NPVm/NPVom能夠顯著使na
7、(i)ve CD4+ CD25-T細胞轉變?yōu)镃D4+ CD25+ Foxp3+TGF+β+調節(jié)性T細胞;在用OVA作用后,由NPVom誘導的調節(jié)性T細胞的增殖活性顯著增高,而由NPVm誘導的調節(jié)性T細胞的增殖活性則無明顯變化;用牛血清白蛋白(BSA)作用于NPVom致敏DCs的增值情況進行檢測,結果表明調節(jié)性T細胞的增殖活性無顯著影響;分別將由NPVom誘導的調節(jié)性T細胞以及由NPVm誘導的調節(jié)性T細胞通過過繼性轉移的方式作用于變應性鼻
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