肺腺癌細(xì)胞總RNA轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)特異性CTL的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)研究.pdf

1、目的:針對肺腺癌缺少已知腫瘤抗原和晚期患者腫瘤組織來源困難兩大難題,利用建系的腫瘤細(xì)胞株與活體組織腫瘤細(xì)胞有共享腫瘤抗原的特點(diǎn),自行構(gòu)建RNA-DCs疫苗,誘導(dǎo)產(chǎn)生肺腺癌抗原特異性的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs),探討其對肺腺癌移植瘤裸鼠的抗腫瘤作用。
　　方法:(1)從外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)中誘導(dǎo)產(chǎn)生DCs,提取人肺腺癌細(xì)胞株A549總RNA電轉(zhuǎn)染DCs,轉(zhuǎn)染后的DCs與自體

2、T淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng),誘導(dǎo)產(chǎn)生人肺腺癌抗原特異性的CTL(RNA-DCs-CTL)。(2)實(shí)驗(yàn)分為轉(zhuǎn)染RNA的DCs組(RNA-DCs)、轉(zhuǎn)染PBS的DCs組(PBS-DCs)和未轉(zhuǎn)染DCs組(N-DCs),流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測定混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)后不同組別CD8+T細(xì)胞比例,RT-PCR證明總RNA轉(zhuǎn)染效率,3H-TdR摻入檢測T細(xì)胞增殖指數(shù)以及乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測定殺傷腫瘤活性。(3)建立肺腺癌細(xì)胞株A549荷瘤裸鼠模型,過繼

3、回輸混合培養(yǎng)后的T細(xì)胞,比較不同組別腫瘤體積的差異,計(jì)算抑瘤率,免疫組化法檢測移植瘤組織中Bax、Bcl-2、COX-2和VEGF的表達(dá),并用全自動圖像分析系統(tǒng)分析其平均光密度值(mean optical density,MOD)。
　　結(jié)果:(1)RNA-DCs和自體T細(xì)胞共培養(yǎng)后CD8+T細(xì)胞大量增殖,與PBS-DCs和N-DCs組相比差異顯著(P<0.05)。(2)RT-PCR證明電穿孔法可成功使A549的總RNA轉(zhuǎn)染入DC

4、s并可使DCs表達(dá)腫瘤抗原。(3)RNA-DCs可顯著刺激自體T淋巴細(xì)胞增殖,并且誘導(dǎo)產(chǎn)生腫瘤特異性CTLs,對A549細(xì)胞產(chǎn)生特異性殺傷作用,而PBS轉(zhuǎn)染組與未轉(zhuǎn)染組則無明顯作用(P<0.05)。3H-TdR液閃法測得各組的cpm值分別為:陽性對照組(ConA+T細(xì)胞):17105±130,RNA-DCs組:7759±493,PBS-DCs組:2611±161,N-DCs組:2248±332,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);(3)成

5、功建立肺腺癌裸鼠移植瘤模型。過繼回輸RNA-DCs-CTL組裸鼠荷瘤體積明顯小于回輸PBS-DCs-T和N-DCs-T組(P<0.05),抑瘤率分別為68.53％和8.62%;(4) RNA-DCs-CTL治療后,腫瘤組織Bax的表達(dá)顯著上調(diào),COX-2、Bcl-2和VEGF的表達(dá)顯著下調(diào)。
　　結(jié)論:1.人肺腺癌細(xì)胞細(xì)胞株A549總RNA轉(zhuǎn)染DCs誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗原特異性CTL(A549-RNA-DCs-CTL)對肺腺癌細(xì)胞裸鼠移植