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文檔簡介
1、目的:
研究洛伐他汀(Lovastatin,LV)對人三陰性乳腺癌干細胞樣細胞(breast cancer stem-like cells,BCSLCs)的體外生物學特性以及對人三陰性乳腺癌細胞裸鼠移植瘤生長的影響。
方法:
1、通過干細胞條件培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)法從人三陰性乳腺癌細胞和非三陰性乳腺癌細胞富集和擴增BCSLCs。用流式細胞技術(shù)檢測其表面干細胞標志物CD44/CD24的表達。通過裸鼠皮下移植瘤實驗證
2、實乳腺癌干細胞的體內(nèi)成瘤能力。
2、用不同濃度LV在常氧或缺氧條件下對乳腺癌親本細胞或干細胞樣細胞進行處理,用MTT法測定細胞增殖活性,用劃痕法測定細胞體外遷移能力,用流式細胞儀測定細胞凋亡。
3、用不同濃度LV對人三陰性乳腺癌細MDA-MB-231進行處理,用蛋白質(zhì)免疫印跡法分析乳腺癌干細胞標志蛋白CD44、EMT相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子β-catenin和上皮標志物E-cadherin表達水平。
4、小鼠皮下注
3、射MDA-MB-231細胞1周后,給予不同濃度的LV(2mg/kg或10 mg/kg)或生理鹽水,每周給藥2次持續(xù)給藥3周。每周測量瘤體體積;處死動物時取乳腺腫瘤組織測量瘤體重量;腫瘤組織經(jīng)常規(guī)石蠟包埋,進行組織病理學和免疫組化分析。
結(jié)果:
1、經(jīng)超低粘附懸浮培養(yǎng)法從三陰性及非三陰性乳腺癌細胞富集和擴增BCSLCs。用流式分析儀對MDA-MB-231來源的BCSLCs表面標志進行鑒定獲得CD44+/CD24low的
4、細胞純度約80%;在裸鼠成瘤實驗中,與MDA-MB-231親本細胞相比,MDA-MB-231干細胞樣細胞在裸鼠體內(nèi)成瘤能力更強。表明我們分離富集的BCSLCs具有乳腺癌干細胞特征。
2、與來源于非三陰性乳腺癌的親本細胞和干細胞樣細胞相比,LV能夠優(yōu)先抑制三陰性乳腺癌來源的親本細胞和干細胞樣細胞的增殖和遷移并優(yōu)先促進其凋亡。另外,與親本細胞相比,LV能夠優(yōu)先抑制乳腺癌干細胞樣細胞的增殖。
3、LV能夠抑制三陰性乳腺癌細
5、胞中與干細胞特征相關(guān)蛋白的水平,表明LV能夠抑制乳腺癌細胞的干性特征。
4、在裸鼠皮下移植瘤模型中,LV能夠抑制三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231移植瘤的瘤體重量和體積。瘤體組織標本免疫組化分析顯示與對照組相比,LV處理組CD44、CD138蛋白水平顯著降低,表明LV在體內(nèi)能夠抑制三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231移植瘤的成瘤能力和干性特征。
結(jié)論:
1.通過懸浮培養(yǎng)法富集和擴增的BCSLCs具有乳腺癌
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