AnnexinⅡ在乳腺癌中的表達(dá)以及對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲的影響.pdf

1、目的：1、研究AnnexinⅡ在人乳腺癌組織以及人乳腺癌細(xì)胞株（MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7）的表達(dá)情況，闡明AnnexinⅡ及s100A10的表達(dá)與人乳腺癌侵襲力的關(guān)系。2、探討AnnexinⅡ-siRNA沉默AnnexinⅡ基因表達(dá)對(duì)MDA-MB-435s細(xì)胞s100A10、c-Myc表達(dá)的影響。3、探討AnnexinⅡ-siRNA沉默AnnexinⅡ基因表達(dá)對(duì)MDA-MB-435s細(xì)胞

2、的增殖、細(xì)胞周期及侵襲力的影響。 方法： 1、采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)正常人乳腺組織、導(dǎo)管原位癌及侵襲性導(dǎo)管癌組織中AnnexinⅡ及s100A10蛋白的表達(dá)情況；Millicell小室測(cè)定4株人乳腺癌細(xì)胞（MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7）體外侵襲力；用RT-PCR、蛋白印跡技術(shù)分別檢測(cè)高侵襲性人乳腺癌細(xì)胞（MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30）與低侵

3、襲性人乳腺癌細(xì)胞（MCF-7）中AnnexinⅡ與s100A10 mRNA和蛋白的表達(dá)情況。 2、體外化學(xué)合成針對(duì)AnnexinⅡ序列的特異性雙鏈小RNA；以高表達(dá)AnnexinⅡ的人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-435s為研究對(duì)象，脂質(zhì)體2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染MDA-MB-435s，采用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率；分別收集對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR、蛋白印跡和免疫熒光技術(shù)分別檢測(cè)干擾前后AnnexinⅡ、s100A10和c-My

4、c的變化。 3、采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)與Millicell小室分別檢測(cè)干擾前后細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞周期及細(xì)胞侵襲力的變化。 結(jié)果： 1、免疫組化結(jié)果顯示正常乳腺組織上皮細(xì)胞未見(jiàn)AnnexinⅡ與s100A10表達(dá)；相反地，AnnexinⅡ與s100A10高表達(dá)在導(dǎo)管原位癌及侵襲性乳腺癌上皮細(xì)胞（P<0.01）；且AnnexinⅡ與s100A10表達(dá)水平與乳腺癌侵襲特性呈正相關(guān)。RT-PCR、蛋白印跡顯示高侵襲性人

5、乳腺癌細(xì)胞（MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30）中AnnexinⅡ與s100A10 mRNA及蛋白水平顯著高于低侵襲性人乳腺癌細(xì)胞MCF-7（P<0.01）；且AnnexinⅡ與s100A10表達(dá)水平與乳腺癌細(xì)胞侵襲性呈正相關(guān)。激光共聚焦顯微鏡觀察顯示AnnexinⅡ與s100A10共定位于乳腺癌細(xì)胞胞漿與細(xì)胞膜；熒光強(qiáng)度與細(xì)胞侵襲力呈正相關(guān)；而兩者定位分布與侵襲力無(wú)關(guān)。 2、與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組

6、細(xì)胞比較，經(jīng)AnnexinⅡ-siRNA處理的MDA-MB-435s細(xì)胞，AnnexinⅡ mRNA和蛋白的表達(dá)水平顯著降低（P<0.05）；且伴有s100A10與c-Myc蛋白水平明顯降低（P<0.05），但s100A10 mRNA水平無(wú)顯著性變化（P>0.05）。 3、與空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較，經(jīng)AnnexinⅡ-siRNA轉(zhuǎn)染24h的MDA-MB-435s細(xì)胞，增殖無(wú)明顯變化（P>0.05），而在轉(zhuǎn)染48～96h時(shí)，其

7、增殖能力明顯減低（P<0.05）；經(jīng)AnnexinⅡ-siRNA轉(zhuǎn)染48h時(shí)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞G0/G1期明顯增加（P<0.05），S期細(xì)胞明顯減少（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞侵襲力明顯降低（P<0.05）。 結(jié)論： 1、AnnexinⅡ與s100A10高表達(dá)在乳腺癌組織及高侵襲性乳腺癌細(xì)胞中；且其表達(dá)水平與侵襲性呈正相關(guān)。 2、采用siRNA技術(shù)沉默MDA-MB-435s AnnexinⅡ后，細(xì)胞s100A10、c-