HSP70多肽復合物的純化及其負載樹突狀細胞抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的：建立從腫瘤細胞中分離純化熱休克蛋白70(HSP70)多肽復合物的方法，探討其負載樹突狀細胞(dendriticcells，DC)在體外的抗腫瘤作用。 方法：熱處理人胃癌細胞SGC，制備細胞裂解液，用肝素-Sepharose柱、DEAE-Sepharose柱和ADP-Agarose柱進行序貫分離，所得的蛋白行聚丙烯酰胺凝膠電泳及Westernblot鑒定分析。Bradford法測定蛋白的得率。聯(lián)合應用粒/巨細胞集落刺激因子(

2、GM-CSF)及白介素-4(IL-4)從外周血單個核細胞中培養(yǎng)DC，用提純的HSP70多肽復合物負載DC，流式細胞儀檢測負載前后DC表型的變化，用HSP70多肽復合物負載的DC誘導淋巴細胞產(chǎn)生免疫活性細胞，用MTT法檢測淋巴細胞的增值及免疫活性細胞對SGC、BGC和CW-2的殺傷作用。 結果：純化的蛋白經(jīng)鑒定確為相對分子量72KD的HSP70多肽復合物，從1克濕重細胞中可獲取56.36ug的HSP70多肽復合物。利用GM-CSF

3、及IL-4可從外周血單個核細胞中獲取DC，HSP70多肽復合物可促進DC的成熟，表現(xiàn)為DC表面分子HLA-DR、CD83、CD86表達升高。由SGC中提純HSP70多肽復合物負載DC激活淋巴細胞產(chǎn)生免疫活性細胞，僅對SGC有特異性的殺傷作用，而對BGC和CW-2無特異性的殺傷作用。 結論：用上述蛋白層析法可分離出高純度，保留腫瘤抗原信息的HSP70多肽復合物；體外經(jīng)細胞因子誘導獲取的DC經(jīng)HSP70多肽復合物負載后，在體外可激活