TLR2信號通路對人乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲作用的研究.pdf

1、乳腺癌是女性癌癥患者中最常見的惡性腫瘤之一。乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移性是引起乳腺癌患者死亡的主要原因,也是乳腺癌治療中的最大難題之一。因此研究乳腺癌的預(yù)防與臨床治療倍受關(guān)注,研究乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲機制對乳腺癌的治療具有重要的意義。
　　Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)是進(jìn)化上十分保守的重要模式識別受體(PPRs),主要表達(dá)于人類免疫細(xì)胞和上皮細(xì)胞中。通過識別病原相關(guān)分子模式(PAMPs),在機體先天性免疫

2、反應(yīng)發(fā)生過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。近來研究發(fā)現(xiàn),TLRs在包括乳腺癌在內(nèi)的人類惡性腫瘤細(xì)胞表面均有表達(dá),并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移侵襲過程中發(fā)揮重要功能。
　　實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),Toll樣受體2(toll-like receptor2,TLR2)在兩種乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231(高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞系)和MCF-7(低轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞系)中的表達(dá)有較大差異,即高表達(dá)于MDA-MB-231細(xì)胞而低表達(dá)于MCF-7細(xì)胞,其表達(dá)量相差約15

3、00倍。TLR2的表達(dá)差異是否為導(dǎo)致兩種細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力差別的主要原因所在?其機制是怎樣的?為解決這些問題,本課題即以兩種乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231和 MCF-7為研究對象,以LTA作為TLR2的激活劑,特異性的激活TLR2信號通路,研究TLR2信號通路對乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力的影響,探討TLR2信號通路在腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲過程中的作用機制,為惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移機制的研究提供理論基礎(chǔ)。
　　本研究利用MTT法、細(xì)胞創(chuàng)口愈合實

4、驗、Transwell基質(zhì)膠侵襲實驗以及軟瓊脂克隆形成實驗檢測了LTA刺激后兩種乳腺癌細(xì)胞的體外增殖能力、轉(zhuǎn)移侵襲能力和非錨定生長能力,發(fā)現(xiàn)LTA刺激均能使兩種乳腺癌細(xì)胞的增殖能力有所提高,MDA-MB-231細(xì)胞在接受刺激后增殖能力是未接受刺激的對照組的接近2倍,其增強幅度明顯明顯高于MCF-7,且LTA刺激后的MDA-MB-231細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力和非錨定生長能力相比對照組其增強幅度均要明顯高于MCF-7細(xì)胞。進(jìn)而我們將兩種細(xì)胞表面

5、的TLR2用特異性抗體封閉后,發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力和非錨定生長能力相對于未進(jìn)行TLR2封閉的細(xì)胞均發(fā)生了不同程度的降低,MDA-MB-231的各種能力的降低幅度也明顯高于MCF-7。由此我們認(rèn)為TLR2表達(dá)量的不同是造成兩種細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力不同的關(guān)鍵因素。
　　利用ELISA實驗技術(shù)檢測了兩種細(xì)胞在LTA刺激后腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)因子VEGF、IL-6和TGF-β1的表達(dá)情況以及在TLR2中和抗體封閉作用后兩種細(xì)胞腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的

6、表達(dá)分泌的變化情況,發(fā)現(xiàn)LTA刺激后MDA-MB-231細(xì)胞的VEGF、IL-6和 TGF-β1分泌量均明顯提高,其提高幅度分別是MCF-7細(xì)胞的1.5倍、1.3倍和1.2倍。而TLR2抗體封閉作用后的兩種細(xì)胞的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的分泌情況均降低,MDA-MB-231細(xì)胞降低幅度明顯高于MCF-7細(xì)胞。因此我們推斷,LTA可能是通過激活TLR2信號通路進(jìn)而誘導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的分泌來影響了人乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力的變化。
　　最后

7、,利用JNK抑制劑SP600125抑制TLR2介導(dǎo)的信號通路下游關(guān)鍵激酶JNK的活性,檢測到兩種細(xì)胞在JNK激酶活性受到抑制后,LTA刺激引起的細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力和非錨定生長能力均受到了不同程度的抑制,對MDA-MB-231細(xì)胞的抑制程度要明顯高于MCF-7細(xì)胞。說明了JNK在TLR2信號通路介導(dǎo)的人乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲作用機制中發(fā)揮了重要作用。
　　綜上所述,本課題通過對TLR2信號通路在兩種乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲過程中作用進(jìn)行探究,并