PI3K-Akt信號通路對骨橋蛋白介導(dǎo)的人乳腺癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移調(diào)控作用的研究.pdf

1、乳腺癌是危害全球女性健康的最嚴(yán)重的惡性腫瘤疾病，對早期乳腺癌的診斷和治療，可以使患者達到良好的預(yù)后效果。但是，早期乳腺癌的癥狀不易被察覺，所以許多患者在確診時，乳腺癌的惡性程度已經(jīng)加重，癌細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移。目前，針對癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的治療效果不明顯，發(fā)生癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的患者，其生存率很低。因此，對于抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移治療方法的研究成為了熱點。TCGA數(shù)據(jù)庫是利用基因組測序的方法和生物信息學(xué)等手段對癌癥的基因表達數(shù)據(jù)、基因突變數(shù)據(jù)及臨床數(shù)據(jù)進行分類、匯

2、總和綜合，從而有利于提高對癌癥的診斷、治療和預(yù)防癌癥的能力，使研究者能夠更好地理解癌癥的遺傳基礎(chǔ)，為癌癥的研究及治療提供依據(jù)。PI3K-Akt信號通路在細(xì)胞的存活及增殖等生命過程中起到了重要的作用，而在乳腺癌等癌癥中，由于PI3K的表達量異常升高，使其下游的信號分子Akt發(fā)生過度活化，導(dǎo)致PI3K-Akt信號通路發(fā)生失調(diào)，這與乳腺癌等癌癥的發(fā)生與發(fā)展有著密切的聯(lián)系。骨橋蛋白（Osteopontin, OPN）是一種磷酸化糖蛋白，既能夠在

3、細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用，也能夠分泌到細(xì)胞外發(fā)揮其生理功能。在乳腺癌等癌癥中，OPN通過促使多種激酶發(fā)生活化，從而促進了癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移等過程。有研究表明，PI3K-Akt信號通路與OPN的表達之間存在著聯(lián)系，因此本研究選取乳腺癌作為研究對象，去探究PI3K-Akt信號通路是否對OPN的表達起到了調(diào)控作用進而對乳腺癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移過程產(chǎn)生了影響，這對于防治乳腺癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移具有重要的意義
　　本研究從TCGA數(shù)據(jù)庫中獲取了乳腺癌患者

4、的基因表達數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)，分析了在癌組織與癌旁正常組織、不同類型和不同臨床階段的乳腺癌中，PI3K的基因PIK3CA和OPN的基因SPP1的表達圖示，并對上述基因的表達量對患者生存期的影響和上述基因之間的表達相關(guān)性進行了分析。根據(jù)分析結(jié)果，我們認(rèn)為在乳腺癌中，PI3K的過量表達，促使PI3K-Akt信號通路過度激活，從而進一步使OPN的基因發(fā)生過度的表達并促進了乳腺癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移等過程，PI3K-Akt信號通路對OPN的基因表達起到

5、了調(diào)控作用。選取人正常乳腺細(xì)胞株、低轉(zhuǎn)移性人乳腺癌細(xì)胞株和高轉(zhuǎn)移性人乳腺癌細(xì)胞株，并從醫(yī)院獲取了相關(guān)臨床樣本作為實驗材料進行實驗。通過實時熒光定量PCR實驗、蛋白印跡實驗、細(xì)胞爬片免疫組化實驗和石蠟切片免疫組化實驗，檢測了在不同類型的乳腺癌細(xì)胞和組織及正常乳腺細(xì)胞和癌旁正常組織中，PI3K、Akt和OPN在基因及蛋白水平上的表達差異。然后，我們選用了針對PI3K的催化亞基p110α的特異性抑制劑A66對MCF-7和MDA-MB-231細(xì)

6、胞進行處理，通過實時熒光定量PCR實驗、酶聯(lián)免疫吸附實驗、蛋白印跡實驗和細(xì)胞爬片免疫組化實驗，檢測了兩種類型的細(xì)胞在處理后，OPN在基因及蛋白水平上的表達變化；利用MTT實驗和細(xì)胞創(chuàng)口愈合實驗檢測了處理后的兩種類型細(xì)胞的增殖和遷移能力的變化；利用Transwell細(xì)胞侵襲實驗和軟瓊脂克隆形成實驗檢測了處理后的 MDA-MB-231細(xì)胞的侵襲和非錨定生長能力的變化。根據(jù)上述實驗的結(jié)果，證明了在乳腺癌中，PI3K發(fā)生了過表達，促進了Akt的