PI3K-AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)鼻咽癌侵襲和轉(zhuǎn)移影響的初步研究.pdf

1、【目的】 研究PI3K/AKT 信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)鼻咽癌活檢標(biāo)本及鼻咽癌細(xì)胞系亞克隆株CNE-2Z-H5侵襲、轉(zhuǎn)移的影響及其可能的機(jī)制。通過觀察PI3K/AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路特異性抑制劑LY294002對(duì)人低分化鼻咽癌細(xì)胞系亞克隆株 CNE-2Z-H5侵襲、轉(zhuǎn)移的影響及該通路在 CNE-2Z-H5 和人低分化鼻咽癌細(xì)胞系母系CNE-2Z 中表達(dá)的對(duì)比，初步探討PI3K/AKT 信號(hào)傳導(dǎo)通路在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用和阻滯該通路在鼻咽癌治療中

2、可能的潛在價(jià)值。 【方法】 采用免疫組化SP法檢測(cè)30例有淋巴道轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織和30例無淋巴道轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織中PI3K、pAKT和E-cadherin的表達(dá)。應(yīng)用LY294002抑制P13K的活性，以MTT法觀察不同劑量LY294002對(duì)CNE-2Z-H5細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的作用；用免疫細(xì)胞化學(xué)分別檢測(cè)CNE-2Z及不同劑量LY294002處理培養(yǎng)后的CNE-2Z-H5 細(xì)胞中PI3K、pAKT 和 E-cadherin

3、的表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)不同劑量LY294002 處理后的 CNE-2Z-H5 細(xì)胞中 E-cadherin mRNA 的表達(dá)情況。ELISA法分別檢測(cè)CNE-2Z及不同劑量LY294002處理培養(yǎng)后的CNE-2Z-H5細(xì)胞中的磷酸化的AKT的含量；用體外細(xì)胞侵襲、運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LY294002處理培養(yǎng)后的CNE-2Z-H5 細(xì)胞的侵襲和運(yùn)動(dòng)的改變；RT-PCR檢測(cè)AKT2 mRNA 在CNE-2Z和CNE-2Z-H5中的表達(dá)情況。

4、 【結(jié)果】 PI3K、pAKT 和 E-cadherin在非轉(zhuǎn)移組中的陽性率分別為40％(12/30)，46.67％(14/30)，50％(15/30)；在轉(zhuǎn)移組中的陽性率分別為36.67％(11/30)，63.33％(19/30)和40％(12/30)，兩組比較無顯著性差異(P>0.05)。在非轉(zhuǎn)移組中P13K、pAKT 和 E-cadherin 的表達(dá)無顯著相關(guān)性(P>0.05)，在轉(zhuǎn)移組中PI3K與pAKT、pAKT和E

5、-cadherin、PI3K和E-cadherin之間均無顯著相關(guān)性(P>0.05)。 LY294002 對(duì) CNE-2Z-H5 細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖具有抑制作用，而且呈劑量依賴性。在免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，LY294002作用后CNE-2Z-H5細(xì)胞的P13K的蛋白表達(dá)減弱，E-cadherin 的蛋白表達(dá)增強(qiáng),而pAKT 的表達(dá)無明顯變化。CNE-2Z細(xì)胞中的PI3K、pAKT 和 E-cadherin 的蛋白表達(dá)與CNE-2Z-H5

6、細(xì)胞中的三者表達(dá)均無明顯差別。LY294002 可以增加 CNE-2Z-H5 細(xì)胞 E-cadherin mRNA 的表達(dá)。在LY294002 處理的各組CNE-2Z-H5 細(xì)胞能顯著抑制磷酸化的AKT 的表達(dá)，并呈一定的劑量依賴性，CNE-2Z 細(xì)胞中的pAKT 的表達(dá)明顯低于CNE-2Z-H5 細(xì)胞，兩者有顯著性差異(P<0.05)。LY294002還可以抑制CNE-2Z-H5細(xì)胞的侵襲和運(yùn)動(dòng)能力。在CNE-2Z-H5細(xì)胞和CNE-

7、2Z細(xì)胞中，AKT2 mRNA 的表達(dá)無顯著差異。 【結(jié)論】 (1)非轉(zhuǎn)移組和轉(zhuǎn)移組中，PI3K、pAKT和E-cadherin均表達(dá)且差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (2)PI3K的抑制劑LY294002可以有效抑制鼻咽癌CNE-2Z-H5細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，并且呈劑量依賴關(guān)系。 (3)具有高轉(zhuǎn)移性質(zhì)的CNE-2Z-H5細(xì)胞與其母系CNE-2Z中的PI3K、pAKT和E—cadherin的蛋白表達(dá)兩者無顯著性差別；L

8、Y294002可以從mRNA和蛋白水平增加CNE-2Z-H5細(xì)胞中E-cadherin的表達(dá)，抑制癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移；同時(shí)使pAKT的表達(dá)降低；LY294002可以降低鼻咽癌細(xì)胞的侵襲和運(yùn)動(dòng)能力，PI3K/AKT途徑可能是參與鼻咽癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要信號(hào)傳導(dǎo)通路之一。CNE-2Z和CNE-2Z-H5中與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的AKT2在基因水平上的表達(dá)無差異，說明該通路促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移可能是通過增加蛋白的翻譯或過度激活蛋白的磷酸化水平來調(diào)控的。