PI3K-AKt信號通路與正畸牙移動(dòng)關(guān)系的研究.pdf

1、目的：
　　 建立動(dòng)物模型，實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western免疫印跡分析方法，檢測P13K、AKt在正畸牙移動(dòng)牙周組織改建過程中的表達(dá)及變化，探討正畸力作用下兔牙周組織中P13K/AKt信號通路在牙周組織改建過程中的作用。
　　 方法：
　　 1、建立動(dòng)物模型
　　 選用24只日本大耳白兔（體重2.0±0.2kg），建立正畸牙移動(dòng)的動(dòng)物模型，按照3天、5天、7天、14天隨機(jī)分組，每組6只。上頜右側(cè)戴矯治

2、器為實(shí)驗(yàn)組，分別在切牙與磨牙的近頸端纏繞雙股結(jié)扎絲，然后在切牙與磨牙間放置鎳鈦螺簧，力值80g，使磨牙近中移動(dòng)。上頜左側(cè)未戴矯治器為對照組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別于3、5、7、14天處死。
　　 2、RQ-PCR
　　 按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒使用說明操作，選用oligndT作引物合成第一鏈cDNA，RQ-PCR檢測正畸力作用下P13K、AKt在牙周組織中的表達(dá)及變化。所有的產(chǎn)物，在ABI Prism 7500HT 序列檢測系統(tǒng)中運(yùn)行。3次

3、獨(dú)立樣本經(jīng)過3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)后得到的數(shù)據(jù)用公式RQ=2-△△ct 進(jìn)行分析。
　　 3、Wrestern免疫印跡分析
　　 吸取上清，棄沉淀，考馬斯亮藍(lán)法測定樣品中蛋白濃度。上清用8％SDS-PAGE分離然后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，經(jīng)2h50V的轉(zhuǎn)印后 TTBS洗膜5 min×3次。用含5％BSA的TTBS封閉，4℃過夜，再與抗P13K抗體，抗AKt抗體室溫孵育2h，與相應(yīng)的HRP標(biāo)記的羊抗兔二抗（1:5000）室溫孵育1 h，

4、ECL系統(tǒng)顯影。
　　 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件對戴矯治器組與未戴矯治器組進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、RQ-PCR
　　 與對照組比較，加力3天后牙周組織中 P13K、AKt mRNA表達(dá)增加，7天明顯增加，隨后下降。3天、5天、7天、14天各時(shí)段與對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中7天差異顯著（P<0.01）。

5、r>　　 2、Western免疫印跡分析
　　 與RQ-PCR結(jié)果相一致。正畸力作用下P13K、AKt在兔牙周組織中的蛋白表達(dá)增加，7天尤為顯著，隨后下降。3天、5天、7天、14天各時(shí)段與對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中7天差異顯著（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1、正畸力作用下兔牙周組織中P13K、AKt的表達(dá)增加。
　　 2、P13K/AKt信號通路參與正畸牙移動(dòng)過程中的牙周組