梓醇對小膠質(zhì)細(xì)胞TNFR及PI3K-Akt信號通路的影響.pdf

1、目的:在前期實驗的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究梓醇對小膠質(zhì)細(xì)胞TNFR及PI3K/Akt信號通路的影響，探討梓醇調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞功能的作用機(jī)制。
　　方法:分別以BV2、PC12細(xì)胞株代替小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元。將BV2細(xì)胞分為3組:常氧培養(yǎng)組、低氧培養(yǎng)組、低氧培養(yǎng)梓醇干預(yù)組。后兩組分別低氧處理1.5h、4h、8h、14h，其中低氧梓醇干預(yù)組，在低氧前1h加入梓醇，收集各組上清液，用其常氧培養(yǎng)PC12細(xì)胞。MTT法檢測PC12細(xì)胞存活率以反映BV

2、2細(xì)胞功能狀態(tài);同步應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測BV2細(xì)胞MHCⅡ陽性細(xì)胞數(shù);Western Blot方法檢測BV2細(xì)胞TNFR1和TNFR2蛋白表達(dá)量、PI3K/Akt信號通路Akt蛋白及其磷酸化表達(dá)量，Gene Tools from SynGene軟件分析蛋白表達(dá)量，其值用灰度值表示（灰度值與蛋白表達(dá)量成正比）。
　　結(jié)果:
　　1.常氧條件下MHCⅡ陽性的BV2細(xì)胞數(shù)為1.0±0.06％。低氧1.5h時，MHCⅡ陽性細(xì)胞達(dá)4.

3、2±0.12％,此時，BV2細(xì)胞呈現(xiàn)保護(hù)功能;低氧14h時，MHCⅡ陽性細(xì)胞進(jìn)一步升高達(dá)22.4±2.46％，同時，BV2細(xì)胞表現(xiàn)出損害作用。MHCⅡ陽性細(xì)胞數(shù)在低氧與常氧培養(yǎng)組之間存在顯著差異(p＜0.05)。不同低氧條件下梓醇對MHCⅡ表達(dá)影響不同，低氧1.5h MHCⅡ陽性細(xì)胞數(shù)可增加至6.7±0.31％，BV2細(xì)胞保護(hù)作用增強(qiáng);低氧14h MHCⅡ陽性細(xì)胞數(shù)則下降至11.6±0.87％，BV2細(xì)胞的損害作用減弱。MHCⅡ陽性細(xì)胞

4、數(shù)在梓醇干預(yù)組與同期低氧組之間差異具有顯著意義(p＜0.05)。
　　2.常氧培養(yǎng)BV2細(xì)胞p-Akt蛋白表達(dá)量為65.94±1.66。分別低氧培養(yǎng)1.5h、4h、8h、14h，p-Akt表達(dá)量分別為74.15±2.69、68.46±1.68、45.66±2.36、42.81±1.05，與常氧培養(yǎng)組比較，低氧1.5h時p-Akt表達(dá)量增高(p＜0.05)，低氧8h、14h時TNFR2表達(dá)量顯著降低(p＜0.01)。應(yīng)用梓醇干預(yù)，B

5、V2細(xì)胞p-Akt的表達(dá)量在低氧1.5h、8h、14h條件下分別升高至80.97±3.02、58.73±2.56、54.55±5.09，與對應(yīng)低氧組比較差異顯著(p＜0.05)。
　　3.常氧培養(yǎng)BV2細(xì)胞，TNFR1存在陽性表達(dá)，其量為6.57±0.53。分別低氧培養(yǎng)BV2細(xì)胞1.5h、4h、8h、14h，TNFR1表達(dá)量可分別達(dá)到8.05±0.57、9.79±0.67、16.99±0.88、18.95±0.62，較常氧培養(yǎng)組均

6、顯著增加(p＜0.05)。梓醇干預(yù)后，BV2細(xì)胞TNFR1表達(dá)量均降低，其值分別為4.77±0.31、5.64±0.54、8.49±0.33、12.20±0.73，與對應(yīng)低氧組比較差異顯著(p＜0.05)。
　　常氧培養(yǎng)BV2細(xì)胞，TNFR2亦存在陽性表達(dá)，其量為15.31±1.05。分別低氧培養(yǎng)1.5h、4h、8、14h，TNFR2表達(dá)量分別變?yōu)?9.60±0.65、15.58±0.36、12.54±0.79、11.59±0.3

7、8，與常氧培養(yǎng)組比較，低氧1.5h時TNFR2表達(dá)量顯著增高(p＜0.05)，低氧8h、14h時TNFR2表達(dá)量顯著降低(p＜0.01)。應(yīng)用梓醇干預(yù)，BV2細(xì)胞TNFR2的表達(dá)量在低氧1.5h、8h、14h條件下分別升高至22.29±0.79、20.86±1.24、20.19±1.09，與對應(yīng)低氧組比較差異顯著(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.小膠質(zhì)細(xì)胞功能狀態(tài)與小膠質(zhì)細(xì)胞活化程度密切相關(guān)，而后者則與低氧刺激時間有關(guān)