白花丹醌對肝纖維化大鼠PI3K-Akt信號通路的影響.pdf

1、目的:
　　研究白花丹醌對四氯化碳所致的大鼠肝纖維化組織的作用及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信號轉(zhuǎn)導通路的影響。
　　方法:
　　把40只雄性SD大鼠隨機分成空白對照組、模型組、2 mg/kg白花丹醌處理組和3 mg/kg白花丹醌處理組，均每組10只?？瞻讓φ战M按2 mL/kg給予0.9％氯化鈉溶液腹腔注射，剩下的3組均按2 mL/kg給予60％四氯化碳花生油溶液腹腔注射，共6周，均每周3次。在

2、造模后的第三周起，2組白花丹醌處理組分別給予2 mg/kg和3 mg/kg白花丹醌花生油腹腔注射，共4周，均每周2次。常規(guī)檢測血清學指標ALT、AST、A1b，采用放射免疫法測定大鼠血清學指標HA和LN，運用western blot檢測肝組織中PI3K、Akt和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白表達，免疫組織化學染色法觀察p-Akt的定位表達。各組間所得數(shù)據(jù)的均數(shù)比較采用單因素方差分析。各組數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析處理

3、，計量資料用(x)±s表示，各組樣本均數(shù)間的比較采用單因素方差分析，用Levene法檢驗方差齊性，方差齊使用LSD-t法檢驗，方差不齊時則采用Dunnett T3法檢驗，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠肝臟組織病理學表現(xiàn):空白對照組大鼠肝組織質(zhì)地柔軟、光滑，邊緣整齊;肝小葉結(jié)構(gòu)排列正常，肝細胞索規(guī)則有序，沒有看見明顯炎性反應、變性和壞死。模型組大鼠肝臟質(zhì)地堅韌，顏色灰暗，表面粗糙，可以看見顆

4、粒狀小結(jié)節(jié);肝小葉結(jié)構(gòu)明顯破壞或消失，肝細胞索紊亂，肝細胞明顯腫脹，由中央靜脈區(qū)或匯管區(qū)伸出較粗大的纖維條索包繞肝組織形成假小葉。與模型組相比較，白花丹醌處理組大鼠肝臟表面比較光滑，質(zhì)地比較柔軟，肝細胞壞死及纖維組織增生減少，肝細胞水腫好轉(zhuǎn)，炎性細胞浸潤減少，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞減輕。
　　2.大鼠肝臟血清生物化學指標和纖維化指標檢測結(jié)果:模型組大鼠與空白對照組大鼠相比較，血清學指標ALT、AST、HA和LN均明顯升高，A1b明顯降低，

5、差異均有統(tǒng)計學意義（t值分別為-28.87、-27.64、-56.04、-18.13、14.03，均P＜0.05）;2 mg/kg白花丹醌處理組與模型組相比較，血清學指標ALT、AST、HA、LN水平均明顯下降，A1b升高，差異均有統(tǒng)計學意義(t值分別為13.35、16.12、32.45、4.72、-6.58，均P＜0.05);3 mg/kg白花丹醌處理組和2 mg/kg白花丹醌處理組相比較，血清學指標ALT、AST、HA、LN水平也明

6、顯下降，差異均有統(tǒng)計學意義(t值分別為3.21、5.03、7.33、2.79，均P＜0.05)，而血清A1b則無明顯變化。
　　3.肝組織中PI3K、Akt、p-Akt的表達:各組大鼠肝組織中PI3K、Akt的表達差異無統(tǒng)計學意義（F值分別為2.324、1.983，P＞0.05）;空白對照組、模型組、2 mg/kg白花丹醌處理組和3 mg/kg白花丹醌處理組大鼠的p-Akt蛋白表達量分別為0.0821±0.0003、0.7374±

7、0.0037、0.3679±0.0332和0.1327±0.0561，在肝纖維化模型組中的表達高于空白對照組(t=851.302，P＜0.05)，白花丹醌處理后下降(t值分別-71.858和28.363，均P＜0.05)。免疫組化染色顯示，p-Akt蛋白表達陽性為細胞核染成棕黃色，陰性為細胞核染成淡藍色。p-Akt蛋白表達主要集中在肝細胞核中?？瞻讓φ战M大鼠肝組織p-Akt蛋白少量表達于匯管周圍，在肝細胞內(nèi)幾乎沒有表達;模型組大鼠p-A