人uPA基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)CCL4誘導(dǎo)肝纖維化大鼠PI3K-AKT信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：探討人uPA基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)CCL4誘導(dǎo)肝纖維化大鼠的治療作用及對(duì)PI3K/AKT信號(hào)通路的影響。
　　方法： SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng),用攜帶人uPA基因的重組腺病毒（AduPA）轉(zhuǎn)染 BMSCs。隨機(jī)選取40只周齡6-8周的清潔級(jí)雄性SD大鼠，其中30只大鼠采用CCl4法建立肝纖維化模型，皮下注射40％ CCl4橄欖油混合液持續(xù)8周（每天一次）。正常對(duì)照組（10只）皮下注射等量橄欖油。在建

2、模第4周末，將全部大平均分為四組，給予不同干預(yù)措施，分別為uPA-BMSCs組（大鼠尾靜脈注射2×106AduPA轉(zhuǎn)染的BMSCs）、 BMSCs組（大鼠尾靜脈注射2×106BMSCs）、模型組（大鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水）及正常對(duì)照組（大鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水）。全部大鼠于第8周末處死，留取血清及肝組織標(biāo)本。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肝星狀干細(xì)胞的凋亡和活化。Western blot法檢測(cè)各組大鼠肝臟uPA蛋白及PI3K/AKT信號(hào)通路

3、相關(guān)蛋白表達(dá)；RT-qPCR檢查各組大鼠肝臟中MMP-2 mRNA、TIMP-1mRNA及COL-1 mRNA的表達(dá)
　　結(jié)果：
　　1、正常對(duì)照組中SD大鼠肝組織的α-SMA表達(dá)量極少，僅表達(dá)在中央靜脈管壁、Disse間隙。模型組中大鼠肝細(xì)胞的α-SMA表達(dá)量顯著增多，染色深度明顯加深。而與模型組相比，uPA-BMSCs組和BMSCs組兩組大鼠肝組織中α-SMA表達(dá)量均明顯下降，且uPA-BMSCs組中α-SMA表達(dá)下降程

4、度及著色深度較BMSCs組更為顯著。
　　2、α-SMA和TUNEL免疫熒光雙染色結(jié)果示：正常對(duì)照組中，因?yàn)閹缀鯖]有激活的肝星狀細(xì)胞（α-SMA染紅色陽(yáng)性）。而與uPA-BMSCs組和BMSCs組相比較，模型組中Disse間隙見較多激活的肝星狀細(xì)胞（α-SMA染紅色陽(yáng)性），但是發(fā)生凋亡的肝星狀細(xì)胞數(shù)目明顯較少（TUNEL+α-SMA雙陽(yáng)性）。而uPA-BMSCs組肝星狀細(xì)胞凋亡的數(shù)目較BMSCs組多，雙染色程度較BMSCs組深。<

5、br>　　3、PI3K信號(hào)通路相關(guān)蛋白p-pi3k、p-AKT、p-GSK-3β蛋白檢測(cè)結(jié)果顯示：與Model組相比，uPA-BMSCs組和BMSCs組大鼠肝組織中p-pi3k、p-AKT、p-GSK-3β蛋白的表達(dá)量均明顯減少，且uPA-BMSCs組中三種蛋白的表達(dá)量較BMSCs組更低。
　　4、RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組相比，Model組大鼠肝組織中TIMP-1 MRNA、COL-1 mRNA的表達(dá)水平均明顯升高

6、,而MMP-2 MRNA的表達(dá)水平顯著下降；而與Model組相比，uPA-BMSCs組和BMSCs組兩組大鼠肝組織中TIMP-1 MNRA、COL-1 mRNA的表達(dá)水平均明顯下降，而MMP-2 MNRA的表達(dá)水平顯著升高；且uPA-BMSCs組中TIMP-1mRNA及COL-1 mRNA的表達(dá)表達(dá)水平下降程度及 MMP-2 MRNA升高程度較BMSCs組更為顯著。
　　結(jié)論：人uPA基因修飾的BMSCs能有效預(yù)防和改善CCL4誘