中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶NE對(duì)人肝癌細(xì)胞PI3K-Akt、MEK-ERK信號(hào)通路作用的研究.pdf

1、目的:研究中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞內(nèi)PI3K/Akt、MEK/ERK信號(hào)通路的作用并探討相關(guān)機(jī)制,同時(shí)觀察NE對(duì)HepG2細(xì)胞增殖與凋亡的影響,為肝細(xì)胞肝癌發(fā)病機(jī)制的研究提供新的思路。
　　方法:激光共聚焦法觀察NE在細(xì)胞內(nèi)的定位;Western印跡雜交法檢測(cè)NE作用后HepG2細(xì)胞內(nèi)PI3K/Akt、MEK/ERK信號(hào)通路活化狀態(tài)的變化并分析其相關(guān)性;設(shè)定不同濃度

2、的NE作用于HepG2細(xì)胞,利用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況;用流式細(xì)胞儀技術(shù)分析特定濃度NE作用后的細(xì)胞在受到化療藥物殺傷時(shí)細(xì)胞凋亡的變化;所得數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:激光共聚焦實(shí)驗(yàn)表明NE可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),且主要位于細(xì)胞質(zhì)靠胞膜側(cè);20nM和40nM的NE處理HepG2細(xì)胞后p-Akt的水平分別提高+45％和+74%(P<0.01),40nM組與20nM相比,p-Akt水平提高了20%(P<0.0

3、1),Akt、p-MAPK(Erk1/2)和MAPK(Erk1/2)無(wú)明顯改變(P>0.05);CCK-8法檢測(cè)不同濃度NE(20nM,40nM)作用細(xì)胞后的吸光度(OD值),結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)NE作用后的細(xì)胞吸光度明顯增加;流式細(xì)胞儀檢測(cè)HepG2細(xì)胞在經(jīng)過(guò)15ug/ml絲裂霉素(MMC)處理后,凋亡率為39.7±2.3%,經(jīng)過(guò)同樣處理的NE(40nM)/HepG2細(xì)胞,凋亡率降至15.7±1.5%(P<0.01)。
　　結(jié)論:NE可以