PI3K-AKT信號(hào)通路在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖和分化中的作用研究.pdf

1、第一部分 PI3K/AKT信號(hào)通路在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖中的作用研究
　　 目的:探討P機(jī)制I3K/AKT信號(hào)通路在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖中的作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，接種于96孔板，接種濃度(1-5)×105/ml，每孔100ul。接種24小時(shí)后，給予LY294002處理細(xì)胞，作用24h、48h;更換無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12h后用IGF-1處理細(xì)胞，作用12h、24h

2、; MTT法測每組細(xì)胞OD值，計(jì)算細(xì)胞存活率。
　　 結(jié)果:24h、48h后LY294002組細(xì)胞存活率小于對(duì)照組，且細(xì)胞存活率隨藥物濃度及作用時(shí)間的增加而降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)照組各濃度之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;12h、24h后IGF-1組與對(duì)照組相比，細(xì)胞存活率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:PI3K/AKT信號(hào)通路與神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖過程密切相關(guān)，抑制PI3K/AKT信號(hào)通路可顯著阻礙神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖

3、，而PI3K/AKT信號(hào)通路激動(dòng)劑可促進(jìn)神經(jīng)母細(xì)胞瘤增殖。
　　 第二部分 PI3K/AKT信號(hào)通路在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化中的作用研究
　　 目的:探討PI3K/AKT信號(hào)通路在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化中的作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，接種于6孔板，接種濃度(1-5)×106/ml，每孔2ml。接種24小時(shí)后，給予LY294002處理細(xì)胞;IGF-1各組先更換無血清的

4、培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞12h后，再用IGF-1處理細(xì)胞;LY294002作用48h后，IGF-1作用12h后，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)有無分化改變，熒光定量PCR(FQ-PCR)法檢測TrkA基因mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:形態(tài)學(xué)觀察，LY294002組和IGF-1組均未出現(xiàn)明顯的分化形態(tài)學(xué)改變。FQ-PCR顯示LY294002組細(xì)胞TrkA表達(dá)水平較DMSO對(duì)照組、空白對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;IGF-1組TrkA表達(dá)水平較