SDF-1激活PI3K-Akt通路在卵巢癌細(xì)胞增殖和侵襲中的作用.pdf

1、目的：
　　通過觀察基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(stromal cell-derivedfactor l，SDF-1)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt)信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制劑LY294002對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3和CAOV3增殖和侵襲能力的影響，探討SDF-1對(duì)上皮性卵巢癌細(xì)胞的增殖和侵襲產(chǎn)生影響的分子機(jī)制中是否有PI3K/Akt信號(hào)

2、傳導(dǎo)通路的作用。
　　方法：
　　1.將卵巢癌細(xì)胞SKOV3和CAOV3分別分為以下4組：（1）空白對(duì)照組，（2）實(shí)驗(yàn)組1（含100ng/ml SDF-1的培養(yǎng)液），（3）實(shí)驗(yàn)組2（含50μmol/L LY294002的培養(yǎng)液），（4）實(shí)驗(yàn)組3（預(yù)先用含50μmol/L LY294002的培養(yǎng)液作用卵巢癌細(xì)胞0.5h后再加入含100ng/ml SDF-1的培養(yǎng)液）。
　　2.將卵巢癌細(xì)胞SKOV3和CAOV3分別在不同

3、藥物處理?xiàng)l件下培養(yǎng)24h、48h和72h后，應(yīng)用四甲基偶氨唑藍(lán)比色（MTT）法檢測(cè)兩種卵巢癌細(xì)胞在不同藥物處理?xiàng)l件下培養(yǎng)不同時(shí)間的細(xì)胞增殖能力。
　　3.將卵巢癌細(xì)胞SKOV3和CAOV3分別在不同藥物處理?xiàng)l件下培養(yǎng)48h后運(yùn)用體外微孔隔離室板（Transwell）法檢測(cè)兩種卵巢癌細(xì)胞的侵襲能力。
　　4.運(yùn)用蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞SKOV3和CAOV3分別在不同藥物處理?xiàng)l件下培養(yǎng)48h后，

4、Akt的磷酸化程度和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的分泌情況。
　　結(jié)果：
　　1.不同藥物處理?xiàng)l件下卵巢癌細(xì)胞 SKOV3的 MTT結(jié)果：不同藥物作用24h對(duì)卵巢癌細(xì)胞 SKOV3的增殖作用無明顯影響，四組卵巢癌細(xì)胞吸光度值之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。不同藥物作用48h和72h時(shí),SDF-1組（實(shí)驗(yàn)組1）與對(duì)照組進(jìn)行比較，SDF-1可以明顯促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞S

5、KOV3的增殖(P＜0.05)；50μmol/L的 LY294002組（實(shí)驗(yàn)組2）以及預(yù)先用50μmol/L的LY294002處理卵巢癌細(xì)胞SKOV3后再加入100ng/ml的SDF-1組（實(shí)驗(yàn)組3）分別與對(duì)照組進(jìn)行比較，卵巢癌細(xì)胞SKOV3的增殖能力明顯減弱(P＜0.05）；而預(yù)先用50μmol/L的LY294002處理卵巢癌細(xì)胞SKOV3后再加入100ng/ml的SDF-1組（實(shí)驗(yàn)組3）與100ng/ml的SDF-1組（實(shí)驗(yàn)組1）進(jìn)

6、行比較，SDF-1對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3促進(jìn)增殖的作用明顯被抑制(P＜0.05)，同時(shí)預(yù)先用50μmol/L的 LY294002處理卵巢癌細(xì)胞SKOV3后再加入100ng/ml的SDF-1組（實(shí)驗(yàn)組3）與50μmol/L的LY294002組（實(shí)驗(yàn)組2）進(jìn)行比較，兩組卵巢癌細(xì)胞吸光度值之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　不同藥物處理?xiàng)l件下卵巢癌細(xì)胞 CAOV3的 MTT結(jié)果：不同藥物分別作用于卵巢癌細(xì)胞CAOV324h、4

7、8h和72h時(shí)，100ng/ml的SDF-1組與對(duì)照組進(jìn)行比較， SDF-1可以明顯促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞 CAOV3的增殖(P＜0.05)；50μmol/L的LY294002組以及預(yù)先用50μmol/L的LY294002處理卵巢癌細(xì)胞CAOV3后再加入100ng/ml的SDF-1組分別與對(duì)照組進(jìn)行比較，卵巢癌細(xì)胞CAOV3的增殖能力明顯減弱(P＜0.05）；而預(yù)先用50μmol/L的LY294002處理卵巢癌細(xì)胞CAOV3后再加入100ng/

8、ml的SDF-1組與100ng/ml的SDF-1組進(jìn)行比較，SDF-1對(duì)卵巢癌細(xì)胞CAOV3的促進(jìn)增殖的作用明顯被抑制(P＜0.05)，同時(shí)預(yù)先用50μmol/L的LY294002處理卵巢癌細(xì)胞CAOV3后再加入100ng/ml的SDF-1組與50μmol/L的LY294002組進(jìn)行比較，兩組卵巢癌細(xì)胞吸光度值之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　2.體外細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果：100 ng/ml的SDF-1組與對(duì)照組進(jìn)行比較，

9、SDF-1可以明顯促進(jìn)兩種卵巢癌細(xì)胞的侵襲(P＜0.05)；50μmol/L的 LY294002組以及預(yù)先用50μmol/L的 LY294002處理兩種卵巢癌細(xì)胞后再加入100ng/ml的SDF-1組分別與對(duì)照組進(jìn)行比較，兩種卵巢癌細(xì)胞的侵襲能力明顯減弱(P＜0.05）；而預(yù)先用50μmol/L的LY294002處理兩種卵巢癌細(xì)胞后再加入100ng/ml的SDF-1組與100ng/ml的SDF-1組進(jìn)行比較，SDF-1對(duì)兩種卵巢癌細(xì)胞促

10、進(jìn)侵襲的作用明顯被抑制(P＜0.05)，同時(shí)預(yù)先用50μmol/L的LY294002處理兩種卵巢癌細(xì)胞后再加入100ng/ml的SDF-1組與50μmol/L的LY294002組進(jìn)行比較，兩種卵巢癌細(xì)胞的侵襲能力無明顯差異(P＞0.05）。
　　3.Western Blot結(jié)果：卵巢癌細(xì)胞SKOV3和CAOV3在不同藥物處理48h后表達(dá)Akt、p-Akt和MMP-9蛋白量的變化基本一致，在基礎(chǔ)狀態(tài)下兩種卵巢癌細(xì)胞內(nèi)均有一定程度的P

11、I3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活以及MMP-9蛋白的分泌，而且兩種卵巢癌細(xì)胞在不同藥物處理?xiàng)l件下表達(dá)Akt蛋白的量均無明顯差異（P＞0.05）。100ng/ml的SDF-1組與對(duì)照組進(jìn)行比較，SDF-1對(duì)PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路中Akt的活化以及MMP-9蛋白的分泌起到促進(jìn)作用(P＜0.05)；50μmol/L的LY294002組以及預(yù)先用50μmol/L的LY294002處理兩種卵巢癌細(xì)胞后再加入100ng/ml的SDF-1組分別

12、與對(duì)照組進(jìn)行比較，表達(dá)p-Akt和MMP-9蛋白的量均明顯減少(P＜0.05）；而預(yù)先用50μmol/L的LY294002處理兩種卵巢癌細(xì)胞后再加入100ng/ml的SDF-1組與100ng/ml的SDF-1組進(jìn)行比較，SDF-1對(duì)Akt活化和MMP-9蛋白分泌的促進(jìn)作用明顯被抑制(P＜0.05)，同時(shí)預(yù)先用50μmol/L的 LY294002處理兩種卵巢癌細(xì)胞后再加入100ng/ml的SDF-1組與50μmol/L的LY294002組

13、進(jìn)行比較，Akt的活化程度以及MMP-9蛋白分泌之間的差異均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.SDF-1對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系SKOV3和CAOV3的增殖和侵襲起促進(jìn)作用；
　　2.PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制劑LY294002對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系SKOV3和CAOV3的增殖和侵襲起抑制作用；
　　3.阻斷PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路后，SDF-1對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系SKOV3和CAOV3增殖和侵襲的