SDF-1激活PI3K-Akt通路在卵巢癌細胞增殖和侵襲中的作用.pdf

1、目的：
　　通過觀察基質細胞衍生因子-1(stromal cell-derivedfactor l，SDF-1)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt)信號傳導通路抑制劑LY294002對卵巢癌細胞SKOV3和CAOV3增殖和侵襲能力的影響，探討SDF-1對上皮性卵巢癌細胞的增殖和侵襲產(chǎn)生影響的分子機制中是否有PI3K/Akt信號

2、傳導通路的作用。
　　方法：
　　1.將卵巢癌細胞SKOV3和CAOV3分別分為以下4組：（1）空白對照組，（2）實驗組1（含100ng/ml SDF-1的培養(yǎng)液），（3）實驗組2（含50μmol/L LY294002的培養(yǎng)液），（4）實驗組3（預先用含50μmol/L LY294002的培養(yǎng)液作用卵巢癌細胞0.5h后再加入含100ng/ml SDF-1的培養(yǎng)液）。
　　2.將卵巢癌細胞SKOV3和CAOV3分別在不同

3、藥物處理條件下培養(yǎng)24h、48h和72h后，應用四甲基偶氨唑藍比色（MTT）法檢測兩種卵巢癌細胞在不同藥物處理條件下培養(yǎng)不同時間的細胞增殖能力。
　　3.將卵巢癌細胞SKOV3和CAOV3分別在不同藥物處理條件下培養(yǎng)48h后運用體外微孔隔離室板（Transwell）法檢測兩種卵巢癌細胞的侵襲能力。
　　4.運用蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測卵巢癌細胞SKOV3和CAOV3分別在不同藥物處理條件下培養(yǎng)48h后，

4、Akt的磷酸化程度和基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的分泌情況。
　　結果：
　　1.不同藥物處理條件下卵巢癌細胞 SKOV3的 MTT結果：不同藥物作用24h對卵巢癌細胞 SKOV3的增殖作用無明顯影響，四組卵巢癌細胞吸光度值之間的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。不同藥物作用48h和72h時,SDF-1組（實驗組1）與對照組進行比較，SDF-1可以明顯促進卵巢癌細胞S

5、KOV3的增殖(P＜0.05)；50μmol/L的 LY294002組（實驗組2）以及預先用50μmol/L的LY294002處理卵巢癌細胞SKOV3后再加入100ng/ml的SDF-1組（實驗組3）分別與對照組進行比較，卵巢癌細胞SKOV3的增殖能力明顯減弱(P＜0.05）；而預先用50μmol/L的LY294002處理卵巢癌細胞SKOV3后再加入100ng/ml的SDF-1組（實驗組3）與100ng/ml的SDF-1組（實驗組1）進

6、行比較，SDF-1對卵巢癌細胞SKOV3促進增殖的作用明顯被抑制(P＜0.05)，同時預先用50μmol/L的 LY294002處理卵巢癌細胞SKOV3后再加入100ng/ml的SDF-1組（實驗組3）與50μmol/L的LY294002組（實驗組2）進行比較，兩組卵巢癌細胞吸光度值之間的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　不同藥物處理條件下卵巢癌細胞 CAOV3的 MTT結果：不同藥物分別作用于卵巢癌細胞CAOV324h、4

7、8h和72h時，100ng/ml的SDF-1組與對照組進行比較， SDF-1可以明顯促進卵巢癌細胞 CAOV3的增殖(P＜0.05)；50μmol/L的LY294002組以及預先用50μmol/L的LY294002處理卵巢癌細胞CAOV3后再加入100ng/ml的SDF-1組分別與對照組進行比較，卵巢癌細胞CAOV3的增殖能力明顯減弱(P＜0.05）；而預先用50μmol/L的LY294002處理卵巢癌細胞CAOV3后再加入100ng/

8、ml的SDF-1組與100ng/ml的SDF-1組進行比較，SDF-1對卵巢癌細胞CAOV3的促進增殖的作用明顯被抑制(P＜0.05)，同時預先用50μmol/L的LY294002處理卵巢癌細胞CAOV3后再加入100ng/ml的SDF-1組與50μmol/L的LY294002組進行比較，兩組卵巢癌細胞吸光度值之間的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　2.體外細胞侵襲實驗結果：100 ng/ml的SDF-1組與對照組進行比較，

9、SDF-1可以明顯促進兩種卵巢癌細胞的侵襲(P＜0.05)；50μmol/L的 LY294002組以及預先用50μmol/L的 LY294002處理兩種卵巢癌細胞后再加入100ng/ml的SDF-1組分別與對照組進行比較，兩種卵巢癌細胞的侵襲能力明顯減弱(P＜0.05）；而預先用50μmol/L的LY294002處理兩種卵巢癌細胞后再加入100ng/ml的SDF-1組與100ng/ml的SDF-1組進行比較，SDF-1對兩種卵巢癌細胞促

10、進侵襲的作用明顯被抑制(P＜0.05)，同時預先用50μmol/L的LY294002處理兩種卵巢癌細胞后再加入100ng/ml的SDF-1組與50μmol/L的LY294002組進行比較，兩種卵巢癌細胞的侵襲能力無明顯差異(P＞0.05）。
　　3.Western Blot結果：卵巢癌細胞SKOV3和CAOV3在不同藥物處理48h后表達Akt、p-Akt和MMP-9蛋白量的變化基本一致，在基礎狀態(tài)下兩種卵巢癌細胞內均有一定程度的P

11、I3K/Akt信號傳導通路的激活以及MMP-9蛋白的分泌，而且兩種卵巢癌細胞在不同藥物處理條件下表達Akt蛋白的量均無明顯差異（P＞0.05）。100ng/ml的SDF-1組與對照組進行比較，SDF-1對PI3K/Akt信號傳導通路中Akt的活化以及MMP-9蛋白的分泌起到促進作用(P＜0.05)；50μmol/L的LY294002組以及預先用50μmol/L的LY294002處理兩種卵巢癌細胞后再加入100ng/ml的SDF-1組分別

12、與對照組進行比較，表達p-Akt和MMP-9蛋白的量均明顯減少(P＜0.05）；而預先用50μmol/L的LY294002處理兩種卵巢癌細胞后再加入100ng/ml的SDF-1組與100ng/ml的SDF-1組進行比較，SDF-1對Akt活化和MMP-9蛋白分泌的促進作用明顯被抑制(P＜0.05)，同時預先用50μmol/L的 LY294002處理兩種卵巢癌細胞后再加入100ng/ml的SDF-1組與50μmol/L的LY294002組

13、進行比較，Akt的活化程度以及MMP-9蛋白分泌之間的差異均無明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　結論：
　　1.SDF-1對人卵巢癌細胞系SKOV3和CAOV3的增殖和侵襲起促進作用；
　　2.PI3K/Akt信號傳導通路抑制劑LY294002對人卵巢癌細胞系SKOV3和CAOV3的增殖和侵襲起抑制作用；
　　3.阻斷PI3K/Akt信號傳導通路后，SDF-1對人卵巢癌細胞系SKOV3和CAOV3增殖和侵襲的