激活的TLR4促進乳腺癌細胞轉(zhuǎn)移機制的初步探討.pdf

1、目的:本文研究腫瘤細胞損傷釋放物(molecules from damaged tumor cells, DTC-Ms)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)對人乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7的侵襲遷移能力的影響,以探討Toll-like受體4(TLR4)信號通路影響乳腺癌細胞侵襲遷移的可能機制。
　　方法:(1)體外分別用DTC-Ms和LPS刺激MDA-MB-231和MCF-7細胞,48小時后 tr

2、answell方法檢測細胞的侵襲遷移能力。(2)在體外,將MDA-MB-231和MCF-7細胞都分成3組:一組為陰性對照,另兩組分別用DTC-Ms和LPS刺激,24小時后用real-time RT-PCR的方法檢測maspin、TPM1和KAI1的基因表達水平;48小時后用Western blot的方法檢測maspin、TPM1和KAI1的蛋白表達水平。(3)將MDA-MB-231細胞分為5組:一組為陰性對照,另兩組分別用LPS和DTC

3、-Ms刺激,最后兩組提前1h用QNZ阻斷NF-κB后再分別加入刺激因子LPS和DTC-Ms,48小時后Western blot檢測maspin和TPM1。(4)體外分別用DTC-Ms和LPS刺激MDA-MB-231和MCF-7細胞,24小時后 real-time RT-PCR檢測 miR-21。(5)將MDA-MB-231和MCF-7細胞分為5組:一組為陰性對照,另兩組分別用LPS和DTC-Ms刺激,最后兩組提前1h用QNZ阻斷 NF-

4、κB后再加入刺激因子LPS和DTC-Ms,24小時后real-time RT-PCR檢測miR-21。(6)將MDA-MB-231細胞分為5組:一組為陰性對照,另兩組分別用LPS和DTC-Ms刺激,最后兩組提前1h用QNZ阻斷 NF-κB后再加入刺激因子 LPS和DTC-Ms,48小時后transwell方法檢測細胞的侵襲遷移能力。
　　結(jié)果:(1)用DTC-Ms、LPS分別刺激 MDA-MB-231和MCF-7細胞后, MDA-

5、MB-231細胞的侵襲遷移能力變的更強,MCF-7細胞的侵襲遷移能力沒有變化。(2)未刺激的MDA-MB-231和MCF-7細胞都表達maspin、TPM1和KAI1,并且這兩株細胞表達的KAI1在mRNA水平和蛋白水平都基本沒有差異;未刺激的與刺激的MDA-MB-231細胞轉(zhuǎn)錄的maspin、TPM1均明顯低于 MCF-7細胞, DTC-Ms、LPS刺激的MDA-MB-231細胞所表達的的maspin和TPM1蛋白明顯下調(diào)。(3)用Q

6、NZ阻斷MDA-MB-231細胞的NF-κB信號途徑后, LPS和DTC-Ms刺激后maspin和TPM1的蛋白水平無顯著變化。(4)用DTC-Ms、LPS激活MDA-MB-231和MCF-7細胞的TLR4信號通路均能使miR-21表達上調(diào)。(5)用QNZ阻斷MDA-MB-231和MCF-7細胞 NF-κB信號途徑后,LPS和DTC-Ms刺激不能上調(diào) miR-21表達。(6)用QNZ阻斷 MDA-MB-231細胞 NF-κB信號途徑后,

7、LPS和DTC-Ms刺激不能加強其轉(zhuǎn)移能力。
　　結(jié)論:DTC-Ms和LPS可通過激活 MDA-MB-231的TLR4信號通路,進一步激活NF-κB而上調(diào)miR-21的表達,進而抑制maspin和TPM1的表達,從而增強MDA-MB-231的侵襲遷移能力;而MCF-7受到同樣的刺激后,雖然也能激活 NF-κB而上調(diào) miR-21的表達,但是卻不能有效地下調(diào) maspin和TPM1的表達,這可能是MCF-7遷移能力不受刺激物影響的原