MTA1參與化療應激反應促進乳腺癌細胞轉移的作用研究.pdf

1、背景：
　　乳腺癌是目前女性中發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。隨著乳腺癌研究的深入和治療手段的發(fā)展，該病的預后正不斷改善。多數(shù)乳腺癌患者在治療后可獲得明顯緩解，即使Ⅲ期乳腺癌患者五年生存率亦可達到70％左右。但即便如此，患者的長期生存依然很難做到，而導致乳腺癌患者死亡的首要因素就是腫瘤的轉移。因此控制腫瘤轉移是乳腺癌治療相關的研究中亟待解決的問題。
　　化療是乳腺癌治療的常規(guī)手段之一，在臨床上有著廣泛的應用?；熕幬锿ㄟ^其細胞

2、毒性作用殺傷腫瘤細胞，通常用作乳腺癌患者手術前后的輔助治療，或者作為保守治療方法應用于不能接受手術的患者。但既往有研究表明，化療具有潛在的促進腫瘤轉移的效應。我們認為損傷性的環(huán)境因素可以引起腫瘤的應激反應，促使腫瘤轉移以逃避不利環(huán)境?；熥鳛橐环N強烈的損傷因素，對于腫瘤來說顯然是一種強烈的應激信號，是否具有刺激腫瘤轉移的效應，值得探討。
　　轉移相關蛋白1（Metastasis-associated protein1，MTA1）是

3、一個與乳腺癌轉移密切相關的重要分子，其過表達常見于包括乳腺癌在內的多種人類惡性腫瘤，且往往預示著腫瘤的高級別、高轉移傾向和不良預后。更重要的是，MTA1是一種應激反應蛋白，其表達明顯受到環(huán)境因素的調控。損傷性條件如缺氧、紫外線、電離輻射和炎癥等均可誘導MTA1的表達，而化療對乳腺癌細胞中MTA1表達水平的影響，尚未見文獻報道。因此我們希望通過實驗，觀察化療對乳腺癌轉移潛能的影響，分析在此過程中MTA1表達水平的變化及其發(fā)揮的作用，將MT

4、A1與化療后乳腺癌細胞生物學行為的改變聯(lián)系起來。
　　目的：
　　通過觀察化療藥物表柔比星處理前后乳腺癌細胞的遷移和侵襲能力，分析化療對乳腺癌轉移潛能的影響。通過比較表柔比星處理前后乳腺癌細胞中MTA1的表達水平，以及在抑制MTA1表達后觀察表柔比星處理效應的變化，分析MTA1在化療造成的乳腺癌細胞的生物學行為改變中發(fā)揮的作用。通過對乳腺癌小鼠模型給予表柔比星處理，觀察體內化療對乳腺癌肺轉移的影響。
　　方法；

5、　　1.對乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231給予半數(shù)抑制劑量的表柔比星處理6h或12h，用劃痕實驗和transwell實驗分析化療對乳腺癌細胞遷移和侵襲能力的影響。
　　2.提取表柔比星處理組和未處理組細胞的總RNA和蛋白，通過Real-time PCR和Western blot分析表柔比星處理對乳腺癌細胞中MTA1表達水平的影響。
　　3.用無意義的NC siRNA或MTA1特異性siRNA轉染MCF-7和MDA-

6、MB-231細胞，通過Real-time PCR和Western blot分析轉染siRNA對細胞內MTA1表達水平的影響。
　　4.將MCF-7和MDA-MB-231細胞各分為四組，Control組為正常對照，Epi組接受6h表柔比星處理，Epi+ NC siRNA組預轉染NC siRNA后接受6h表柔比星處理，Epi+ MTA1 siRNA組預轉染MTA1特異性siRNA后接受6h表柔比星處理。通過劃痕實驗和transwell

7、實驗觀察細胞的遷移和侵襲能力，觀察MTA1抑制后表柔比星對乳腺癌細胞轉移潛能的影響是否發(fā)生改變。
　　5.建立小鼠4T1乳腺癌模型，實驗組小鼠給予3mg/kg較低劑量表柔比星化療，對照組小鼠給予生理鹽水，每周給藥1次，持續(xù)3周。比較兩組小鼠肺表面轉移灶數(shù)量，分析動物體內化療對乳腺癌轉移潛能的影響。
　　結果：
　　1.劃痕實驗中，表柔比星6h處理組的MCF-7和MDA-MB-231細胞，與對照組相比劃痕愈合距離顯著增加

8、。Transwell實驗中，6h處理組的MDA-MB-231細胞與對照組相比穿膜細胞數(shù)顯著增加。12h處理組細胞中沒有觀察到這些效應。MCF-7細胞難以有效穿膜，transwell實驗并未取得有意義的結果，后續(xù)實驗不再考察MCF-7細胞的侵襲性。
　　2.表柔比星處理后的MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞均表現(xiàn)出MTA1 mRNA水平和蛋白水平的增高。
　　3.與對照組和無意義NC siRNA組細胞相比，轉染MTA1特

9、異性siRNA可以顯著降低MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞中MTA1的mRNA水平和蛋白水平。
　　4.在MCF-7和MDA-MB-231細胞的劃痕實驗中，與Control組細胞相比，Epi組/Epi+ NC siRNA組細胞的劃痕愈合距離顯著增加；與Epi組細胞相比，Epi+ MTA1 siRNA組的劃痕愈合距離顯著減少。在MDA-MB-231細胞的transwell實驗中，Epi組/Epi+ NC siRNA組穿膜細胞

10、數(shù)顯著多于Control組，Epi+ MTA1 siRNA組穿膜細胞數(shù)顯著少于Epi組。
　　5.在4T1乳腺癌小鼠的體內實驗中，相比于對照組，給予表柔比星化療的實驗組小鼠有更多的肺表面轉移灶形成。
　　結論：
　　1.表柔比星處理可以在體外實驗中增加乳腺癌細胞的遷移和侵襲能力，這一效應受到藥物處理時間的制約。處理時間過長會導致細胞嚴重損傷，無法觀察到該效應。
　　2.表柔比星處理可以顯著提高乳腺癌細胞中MTA1