乳腺癌MTA1、MMP-9、TIMP-1的表達與腫瘤侵襲轉移的相關性研究.pdf

1、乳腺癌(breast cancer)是婦女最常見的惡性腫瘤之一，近20年來發(fā)病率呈明顯上升趨勢，嚴重危害婦女的身心健康。乳腺癌治療失敗的主要原因是腫瘤的局部浸潤和向重要臟器的遠處轉移，利用分子生物學手段尋找與腫瘤侵襲轉移相關的因子已成為近年來醫(yī)學界研究的熱點。MTA1是近年來分離出的腫瘤轉移相關基因，已有實驗證明該基因的過度表達與多種惡性腫瘤的侵襲和轉移關系密切。MMP-9是MMPs(基質金屬蛋白酶家族)中的一員， TIMP-1是其特異

2、性抑制物，二者的表達及代謝失衡與腫瘤的侵襲、轉移和臨床預后有密切關系。 本研究運用熒光實時定量PCR技術檢測了乳腺癌組織和配對正常乳腺組織中MTAlmRNA的表達，并運用免疫組化技術檢測了MTA1、MMP-9、TIMP-1蛋白的表達情況。分析三者與乳腺癌臨床病理指標的關系，并探討三個指標之間的相關性，旨在尋找可以較準確預測和診斷乳腺癌侵襲和轉移的生物學指標，為乳腺癌的臨床治療提供更多的實驗證據(jù)。 實驗方法 1．實

3、驗對象選擇、組織樣本的采集與患者臨床資料的整理選取2005年至2006年在鄭州大學第一附屬醫(yī)院就診的乳腺癌患者作為研究對象，采集手術后乳腺癌原發(fā)灶及配對正常乳腺組織標本56對。搜集患者的性別、年齡、腫瘤大小、病理類型等方面的臨床資料，便于統(tǒng)計分析和研究。 2．采用Trizol試劑提取乳腺癌組織RNA。通過1.0％的瓊脂糖凝膠電泳及RNA的OD值評估RNA的含量和純度。 3．使用Promega公司的AMV逆轉錄試劑盒進行c

4、DNA的逆轉錄。PCR擴增β-actin檢測逆轉錄效果。 4．設計MTAl和β-actin基因引物。 5．對MTA1基因在乳腺癌原發(fā)灶及配對正常乳腺組織中表達量進行實時熒光定量PCR檢測。 6．建立標準曲線進行實驗質量控制。 7．免疫組化方法檢測MTA1、MMP-9和TIMP-1三種蛋白的表達情況。 8．運用SPSS12.0統(tǒng)計軟件，采用方差分析、卡方檢驗和t-檢驗等方法對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。按α=0

5、.05水準雙側概率確定結果有無統(tǒng)計學意義。 實驗結果 1．熒光實時定量PCR結果顯示：83.9％(47/56)的乳腺癌原發(fā)灶標本MTA1mRNA的表達量顯著高于配對正常乳腺組織(P<0.05)。MTAlmRNA表達量在淋巴結轉移組顯著高于無淋巴結轉移組，臨床分期Ⅲ、Ⅳ期組顯著高于1、Ⅱ期組，組織學分級Ⅲ級組顯著高于Ⅰ、Ⅱ級組，隨著腫瘤大小的增加，MTA1mRNA的表達量也呈升高的趨勢(P<0.05)。免疫組化檢測MTA1

6、蛋白結果和PCR結果吻合，呈現(xiàn)一致的變化趨勢。 2．乳腺癌中：MMP-9蛋白陽性表達率是73.2％(41/56)，顯著高于配對正常乳腺組織14.3％(8/56)(P<0.05)。MMP-9蛋白表達率在淋巴結轉移組顯著高于無淋巴結轉移組，臨床分期Ⅲ、Ⅳ期組顯著高于Ⅰ、Ⅱ期組(P<0.05)。 3．乳腺癌中TIMP-1蛋白陽性表達率是51.8％(29/56)，顯著高于配對正常乳腺組織10.7(6/56)(P<0.05)。TI

7、MP-1蛋白表達率在無淋巴結轉移組顯著高于淋巴結轉移組，臨床分期Ⅰ、Ⅱ期組顯著高于Ⅲ、Ⅳ期組(P<0.05)。 4．相關性分析顯示：MTA1與MMP-9、MMP-9與TMP-1蛋白陽性表達率之間均存在顯著關聯(lián)性(r=0.363，P<0.01；r=0.323,P<0.05)。 結論 1．MTA1基因的高表達可能阻礙乳腺癌細胞的分化成熟，促進腫瘤的侵襲和轉移。 2．MMP-9蛋白的表達水平與乳腺癌侵襲轉移能力

8、呈正相關。 3．TMP-1蛋白的表達水平與乳腺癌侵襲轉移能力呈負相關。 4．MMP-9與TIMP-1表達關系密切，在乳腺癌浸潤和轉移過程中起著拮抗作用，MMP-9/TIMP-1的動態(tài)表達平衡在維持細胞外基質完整的過程中起主要作用。 5．MTA1可能在基因轉錄水平上調MMP-9的表達，進而使MMP-9/TIMP-1表達失衡，破壞細胞外基質的完整性，從而參與惡性腫瘤的侵襲和轉移過程。 6．聯(lián)合檢測MTA1、MMP-9