Twist調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、全世界每年約有120萬婦女患乳腺癌，在西歐、北美等發(fā)達(dá)國家，乳腺癌發(fā)病率占女性惡性腫瘤首位。值得關(guān)注的是，我國是乳腺癌發(fā)病率增長最快的國家之一，近年來乳腺癌發(fā)病率正以每年3％的速度遞增，成為城市中死亡率增長最快的癌癥。乳腺癌患者死亡的最根本原因不是原位瘤的生長而是由于腫瘤的轉(zhuǎn)移，因此，乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究具有重要意義。 Twist是一種bHLH(basic Helix-loop-Helix)類型的轉(zhuǎn)錄因子，近年來研究發(fā)現(xiàn)，Twi

2、st在乳腺癌中的表達(dá)顯著升高，并能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。為了探索Twist促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用RNA干擾技術(shù)建立了小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1的Twist基因沉默細(xì)胞株。小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Twist沉默能顯著抑制4T1細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移能力。在此基礎(chǔ)上，利用寡核苷酸基因芯片技術(shù)檢測了Twist沉默前后4T1細(xì)胞基因表達(dá)譜的差異性?；蛐酒治霰砻鳎篢wist沉默前后表達(dá)差異顯著的基因有167條，其中與腫瘤相關(guān)的基因有26條，

3、包括15條上調(diào)基因和1l條下調(diào)基因。這些基因可能在Twist引起的腫瘤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。 鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白24p3是上述26條腫瘤相關(guān)基因之一，已有研究表明24p3在一些腫瘤中發(fā)生異常表達(dá)，在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中可能發(fā)揮重要作用。上述基因芯片結(jié)果顯示Twist沉默能顯著促進(jìn)24p3的表達(dá)，這說明Twist有可能通過調(diào)控24p3的表達(dá)來影響乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。 為了研究24p3在Twist介導(dǎo)的乳腺癌轉(zhuǎn)移過程中的作用，

4、我們?cè)谛∈笕橄侔┘?xì)胞株4T1中表達(dá)了24p3，建立了24p3過表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞模型，并通過體外實(shí)驗(yàn)檢測了24p3過表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。研究結(jié)果表明，24p3過表達(dá)對(duì)4T1細(xì)胞的增殖和克隆形成能力沒有顯著影響，但是顯著增強(qiáng)了4T1細(xì)胞的遷移能力。進(jìn)一步利用小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移模型檢測24p3對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照細(xì)胞相比，24p3過表達(dá)后小鼠原位瘤的重量沒有明顯差異，但肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)顯著增多。這些結(jié)果說明在小鼠乳腺

5、癌細(xì)胞中24p3的表達(dá)能促進(jìn)其體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力，提示24p3的表達(dá)程度很可能與乳腺癌的惡性程度密切相關(guān)。同時(shí)，Twist沉默后24p3表達(dá)量被上調(diào)，4T1的轉(zhuǎn)移能力減弱；但是過表達(dá)24p3后沒有抑制反而促進(jìn)4T1細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。這些結(jié)果說明Twist可能并不是通過調(diào)節(jié)24p3的表達(dá)來影響乳腺癌的轉(zhuǎn)移。 綜上所述，本文利用分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的方法，在分子、細(xì)胞和動(dòng)物水平證明了Twist和24p3在小鼠乳腺癌轉(zhuǎn)移過程中的作用。本研究結(jié)果