Cystatin M表達(dá)抗乳腺癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移作用的體外研究.pdf

1、目的：通過對人Cystatin M基因的克隆、表達(dá)，觀察Cystatin M基因表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞體外增殖、黏附及侵襲能力的影響，為進一步探討其抗乳腺癌機制提供理論依據(jù)。 方法： 巢式PCR方法擴增Cystatin M目的片段，基因克隆技術(shù)構(gòu)建pBudCE4．1-Cystatin M重組載體。采用氯化鈣共沉淀法將重組子轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Top10中進行擴增，PCR、酶切、測序方法篩選陽性重組質(zhì)粒。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法，將基因?qū)刖哂?/p>

2、高侵襲性、高轉(zhuǎn)移性的人乳腺癌細(xì)胞株ZR-75-30：Western-blot方法鑒定蛋白表達(dá)；噻唑蘭比色(MTT)法檢測Cystatin M表達(dá)對ZR-75-30細(xì)胞增殖能力及與基質(zhì)膠(Matrigel)、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)粘附能力的影響；Transwell體外侵襲實驗觀察轉(zhuǎn)染后腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化。 結(jié)果： 1．在黏附實驗、Transwell侵襲實驗中，與空載體對照組ZR/pBudCE4.1和未轉(zhuǎn)

3、染組相比，實驗組ZR/Cystatin M細(xì)胞與基質(zhì)及內(nèi)皮細(xì)胞的黏附能力、體外侵襲能力和運動能力均明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 2．在增殖實驗中，實驗組ZR/Cystatin M細(xì)胞的增殖能力(0.337±0.03)與空載體對照組(0.439±0.019)和未轉(zhuǎn)染組(0.445±0.09)相比略有下降，但差異無顯著性。 結(jié)論： Cystatin M表達(dá)可抑制乳腺癌細(xì)胞的黏附和侵襲能力，提示其可作為一個候選的乳腺