“山慈菇-露蜂房”抗乳腺癌轉移作用及機制研究.pdf

1、　　目的：乳腺癌是嚴重威脅女性健康的惡性腫瘤,占女性腫瘤發(fā)病的首位。我國乳腺癌的發(fā)病率亦是逐年升高,且有年輕化趨勢。乳腺癌的侵襲、轉移是導致最終治療失敗甚至死亡的主要原因。研究顯示,乳腺癌轉移與表皮生長因子受體( Epidermal Growth Factor Receptor； EGFR )/基質金屬蛋白酶( Matrix Metalloproteinases , MMPs )分子信號傳導系統密切相關。山慈菇、露蜂房都具有清熱解毒、化

2、痰散結、消腫止痛的功效,在臨床中已被廣泛應用,具有抗癌作用強、毒副作用小的特點,是防治乳腺癌轉移的基本藥對。本研究旨在通過體外實驗觀察中藥藥對“山慈菇-露蜂房”大鼠含藥血清對人乳腺癌高轉移細胞株MDA-MB-231 增殖抑制作用,并檢測藥物血清對 MDA-MB-231 細胞中 EGFR、MMP-9、TIMP-1基因表達的影響,探討“山慈菇-露蜂房”的抗乳腺癌轉移作用及機理,以求為臨床提供抗乳腺癌轉移的有效方藥。
　　方法：1、

3、選用 SD雌性大鼠 30只,按文獻方法制備 5 組大鼠含藥血清,每組 6 只,分別為生理鹽水組、“山慈菇-露蜂房”低劑量組(4.5g/kg)、中劑量組(9g/kg)、高劑量組(18g/kg)、ADM組(9mg/kg·d)；2、應用MTT法檢測各組含藥血清對人乳腺癌高轉移細胞株MDA-MB-231細胞增殖的影響；3、應用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術檢測“山慈菇-露蜂房”含藥血清對人乳腺癌高轉移細胞株 MDA-MB-231 EGF

4、R、MMP-9、TIMP-1 基因表達的影響,并同時檢測內參照β-actin基因的表達。
　　結果：
　　1 MTT比色法檢測各組含藥血清對細胞的體外生長抑制作用
　　1.1 MTT比色法檢測各組含藥血清對MDA-MB-231細胞的生長曲線的影響
　　與生理鹽水組比較,隨著時間的延長,“山慈菇-露蜂房”低、中、高劑量組、阿霉素組均能使細胞生長曲線下降,下降幅度依次由小到大。其中,24~48h時,中

5、藥大劑量組和阿霉素組含藥血清對曲線的影響基本相同；48~72h 時,曲線下降的幅度中藥大劑量組略大于阿霉素組；72~120h,阿霉素組大于中藥大劑量組。
　　1.2 MTT比色法檢測各組含藥血清對MDA-MB-231細胞殺傷情況
　　用 MTT 比色法檢測發(fā)現,三個劑量組的“山慈菇-露蜂房”含藥血清對MDA-MB-231 細胞均有顯著增殖抑制作用,而且有一定的劑量-時間依賴關系。從24h-120h,劑量從小到大,對M

6、DA-MB-231 細胞抑制率由14.99%~20.21% 增至 21.31%~45.82%。
　　2 逆轉錄聚合酶鏈反應( RT-PCR)法檢測各組藥物血清對人乳腺癌高轉移細胞株MDA-MB-231 EGFR、MMP-9、TIMP-1基因表達的影響
　　2.1 10個生理鹽水組樣本中有8個EGFR基因呈高水平表達,其余2個呈低水平表達；10 個“山慈菇-露蜂房”高劑量組樣本中有 9個 EGFR 基因呈低水平表達,其

7、余1個呈高水平表達；
　　2.2 10 個生理鹽水組樣本有 7個 MMP-9 基因呈高水平表達,其余 3 個呈低水平表達；10個“山慈菇-露蜂房”高劑量組樣本中有8個MMP-9基因呈低水平表達,其余2個呈高水平表達；
　　2.3 10個生理鹽水組樣本有8個TIMP-1基因呈低水平表達,其余2個呈高水平表達；10個“山慈菇-露蜂房”高劑量組樣本中有8個TIMP-1基因呈高水平表達,其余2個呈低水平表達。
　　

8、結論：
　　1 “山慈菇-露蜂房”對人乳腺癌高轉移細胞株MDA-MB-231有抑制作用,在一定劑量范圍內,呈劑量正相關。
　　2 “山慈菇-露蜂房”可以下調MDA-MB-231細胞體外EGFR、MMP-9基因表達,上調TIMP-1表達。
　　3 “山慈菇-露蜂房”具有抗乳腺癌轉移的作用,其作用機制可能為：①抑制腫瘤EGFR基因表達,抑制MMP的逆轉錄合成；②改變MMP-9/TIMP-1比值,影響MMP-9的