CHD1L在乳腺癌侵襲轉移中的作用及機制研究.pdf

1、目的：乳腺癌是女性癌癥相關死亡的首要原因。乳腺癌的侵襲和轉移是引起乳腺癌患者死亡的主要原因，其侵襲轉移的機制非常復雜。類似 DNA結合蛋白1的染色質解旋酶（chromodomain helicase/ATP DNA binding protein1-like gene，CHD1L），又稱為ALC1（amplifiedin liver cancer1）是新近發(fā)現(xiàn)的癌基因，可出現(xiàn)在多種實體瘤中。先前研究表明 CHD1L與肝癌的發(fā)生、侵襲和轉

2、移有著密切的關系，而且其與食管癌、卵巢癌、結腸癌及膀胱癌的發(fā)生也有一定的關系。但是，CHD1L在乳腺癌的侵襲轉移方面的研究目前尚未見報道。本研究將在手術切除乳腺癌組織、細胞培養(yǎng)、動物實驗等三個方面研究 CHD1L在乳腺癌侵襲和轉移中所起的作用及影響乳腺癌侵襲轉移的分子機制，為臨床治療乳腺癌提供新的途徑、靶點和理論依據(jù)。
　　方法：應用免疫組織化學染色方法檢測乳腺癌標本中 CHD1L的表達，并分析其表達與乳腺癌臨床病理參數(shù)的相關性。

3、應用Western blot及熒光定量PCR（Real-time PCR，qRT-PCR）檢測人正常乳腺上皮細胞MCF10A及乳腺癌細胞系MCF-7、T47D、SK-BR-7、MDA-MB-231中CHD1L蛋白及mRNA的表達情況；用RNA干擾技術敲除MDA-MB-231細胞中的CHD1L，用過表達載體上調MCF-7細胞中的CHD1L，用Western blot及qRT-PCR檢測細胞中CHD1L蛋白及mRNA的表達情況；應用趨化運動

4、實驗檢測 CHD1L對乳腺癌細胞的趨化運動能力的影響；通過劃痕實驗、transwell侵襲實驗觀察CHD1L對乳腺癌細胞的遷移、侵襲能力的影響。應用Western blot檢測CHD1L對乳腺癌細胞中基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2、MMP-9、磷酸化 Akt（p-Akt）/Akt、p-ARK5/ARK5及pmTOR/mTOR的表達的影響；應用酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzymes linked

5、immunosorbent assay，ELISA）檢測CHD1L對乳腺癌細胞分泌MMP-2、MMP-9表達的改變。利用裸鼠移植實驗觀察 CHD1L對乳腺癌細胞在動物體內的侵襲及轉移情況的影響。
　　結果：CHD1L在乳腺癌中的陽性表達率為41.8％（112/268），明顯高于癌旁相對正常乳腺組織（P＜0.05）。CHD1L蛋白的表達與淋巴結轉移（P=0.008）、腫瘤分化（P=0.020）、遠處轉移（P=0.026）、MMP-2

6、（P=0.035）及MMP-9(P=0.022)表達有關，而與年齡、腫瘤大小、ER、PR及CerbB-2的表達無關（P均＞0.05）。敲除MDA-MB-231細胞中的CHD1L后，細胞的趨化運動能力、細胞侵襲和遷移能力及MMP-2、MMP-9的表達均明顯降低，而過表達MCF-7細胞中CHD1L以后，細胞的趨化運動能力、細胞侵襲和遷移能力及MMP-2、MMP-9的表達均明顯升高。敲除CHD1L以后抑制了EGF誘導的Akt、ARK5及mTO