人參皂苷Rg3抑制乳腺癌細(xì)胞LeY合成及EGFR激活的抗腫瘤機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：人參皂甙Rg3是具有抗腫瘤生長和轉(zhuǎn)移作用的單體抗癌中藥，LeY抗原屬于Lewis血型抗原家族的一員，位于細(xì)胞表面的糖蛋白和糖脂分子末端，也是連接許多表面受體的末端寡糖鏈，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為[Fucα1→2Galβ1→4（Fucal→3）GlcNAc]，為雙巖藻糖寡糖。FUT1/4是其合成的關(guān)鍵酶。LeY在多數(shù)上皮來源的腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，而且與腫瘤細(xì)胞的生長，轉(zhuǎn)移及浸潤密切相關(guān)。EGFR是人表皮生長因子受體家族成員之一，多種惡性腫瘤異常高

2、表達(dá)，當(dāng)其配體EGF等與EGFR結(jié)合后，激活該受體的酪氨酸激酶，導(dǎo)致受體本身及細(xì)胞內(nèi)酪氨酸殘基的磷酸化，后者給細(xì)胞提供一個進(jìn)行細(xì)胞分裂的信號，從而引起細(xì)胞的分裂增殖。通過對EGFR結(jié)構(gòu)的分析，選擇其特定部位作為靶點(diǎn)，使其與配體結(jié)合能力下降，抑制EGFR磷酸化，干擾EGFR信號傳導(dǎo)是目前一些熱點(diǎn)抗腫瘤藥物的作用機(jī)制。 本實(shí)驗(yàn)旨在研究人參皂苷Rg3抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的有效藥物濃度和腫瘤細(xì)胞細(xì)胞增殖核抗原（PCNA）、LeY寡糖抗原及

3、其合成關(guān)鍵酶FUT1/FUT4、EGFR、磷酸化EGFR（p-EGFR）在人參皂苷Rg3作用前后的表達(dá)水平變化及它們之間的相互關(guān)系。 方法：采用高表達(dá)EGFR和LeY的乳腺癌細(xì)胞株MCF-7，通過MTT、RT-PCR、Western blot、流式細(xì)胞術(shù)及間接免疫熒光、免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行分析，根據(jù)人參皂苷Rg3對乳腺癌細(xì)胞的增殖抑制率，得出有效藥物濃度（IC50），分析乳腺癌細(xì)胞PCNA、EGFR、p-EGFR、LeY及其

4、合成關(guān)鍵酶FUT1/FUT4表達(dá)水平變化。 結(jié)果：1.人參皂甙Rg3在濃度為80μg/ml以上時能明顯抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖（p<0.05），24h和48h藥物對腫瘤細(xì)胞的抑制率未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p=0.793）。2.在160μg/ml（24小時的IC50）的有效藥物濃度下，人參皂甙Rg3抑制了乳腺癌細(xì)胞PCNA、p-EGFR、LeY及其合成關(guān)鍵酶FUT1/FUT4的表達(dá)。3.LeY抗體（BG8）封閉乳腺癌細(xì)胞后抑制了EG

5、FR的激活。4.通過免疫共沉淀結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞的EGFR上有LeY寡糖鏈的存在并且在藥物作用后表達(dá)量減少。 上述結(jié)果表明人參皂苷Rg3抗腫瘤作用的可能機(jī)制之一是通過減少EGFR上LeY寡糖鏈合成，使EGFR與其配體的結(jié)合力下降，干擾配體介導(dǎo)的EGFR激活，從而阻斷下游信號傳導(dǎo)路徑，而抑制了腫瘤細(xì)胞的過度增殖。這為探討人參皂甙Rg3對信號傳導(dǎo)途徑及關(guān)鍵靶向分子的調(diào)控提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并將為深入探討研究Rg3抗腫瘤作用分子機(jī)制開