人參皂苷Rg1抑制原代中腦星形膠質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)的機制探討.pdf

1、星形膠質(zhì)細胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)中數(shù)量最多、體積最大的膠質(zhì)細胞，不僅是構(gòu)成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的基本骨架，而且是其正常功能的重要參與者。大量研究顯示星形膠質(zhì)細胞參與了神經(jīng)退行性疾病，如帕金森?。≒arkinson's Disease, PD）的病理過程。激活的星形膠質(zhì)細胞能夠釋放一系列的炎癥因子、活性氧和活性氮等，從而發(fā)揮其神經(jīng)損傷作用。
　　人參皂苷Rg1（ginsenoside Rg1）是傳統(tǒng)中藥人參的主要活性成分，離體細胞和整體動物實驗

2、均證實Rg1具有抗炎作用，但是Rg1通過何種機制作用于星形膠質(zhì)細胞發(fā)揮抗炎作用，目前尚不清楚。Rg1具有甾體結(jié)構(gòu)骨架，本課題組前期研究結(jié)果證實Rg1具有類雌激素樣和類糖皮質(zhì)激素樣作用，可以作為糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoid receptor, GR）的功能性配體，對抗神經(jīng)毒素對神經(jīng)元的損傷。GR是轉(zhuǎn)錄因子核激素受體超家族中的一員，通過與糖皮質(zhì)激素結(jié)合控制多個細胞事件。有研究顯示，GR參與星形膠質(zhì)細胞反應(yīng)性損傷及神經(jīng)膠質(zhì)瘤的

3、發(fā)展。G蛋白偶聯(lián)雌激素受體（G protein-coupled estrogen receptor, GPER）是一種新型的膜性雌激素受體，雌激素可以通過GPER介導(dǎo)的快速非基因組機制，發(fā)揮抗炎和抗凋亡等作用。本課題組前期的工作證實Rg1是一種新的植物雌激素，可通過非配體依賴的方式激活雌激素受體（estrogen receptor, ER），那么Rg1能否通過GR和GPER抑制星形膠質(zhì)細胞的炎癥反應(yīng)？目前研究較少。本研究在脂多糖（lip

4、opolysaccharide, LPS）制備的大鼠原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞炎癥模型上，采用MTT、免疫細胞熒光、real time PCR和western blot技術(shù)方法，應(yīng)用GR的特異性阻斷劑RU486或GPER的特異性阻斷劑G15與Rg1共同作用，探討Rg1的抗炎作用及其分子機制。此外，本研究應(yīng)用Rg1單獨作用星形膠質(zhì)細胞，探討了其對星形膠質(zhì)細胞活化的影響及其分子機制。實驗結(jié)果如下：
　　1.人參皂苷Rg1抑制LPS誘導(dǎo)的星

5、形膠質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)的實驗研究
　?。?）原代培養(yǎng)中腦星形膠質(zhì)細胞，應(yīng)用免疫細胞化學(xué)的方法，檢測星形膠質(zhì)細胞特異性標記物膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）的表達，結(jié)果顯示95%以上為星形膠質(zhì)細胞。
　?。?）單用LPS（1μg/mL）或不同濃度Rg1（0.1,1,10和20μM）處理星形膠質(zhì)細胞24h，MTT結(jié)果顯示，其對星形膠質(zhì)細胞增殖沒有影響（P＞0.05）。

6、r>　?。?）LPS能明顯增加星形膠質(zhì)細胞TNFα、IL-1β和iNOS mRNA的表達（P＜0.001）， 不同濃度Rg1（0.1,1,10和20μM）能夠劑量依賴式的抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，其中20μM Rg1作用最明顯（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001），我們選用20μM的Rg1進行后續(xù)試驗。
　　（4）GR阻斷劑RU486（1μM）不能阻斷Rg1對LPS誘導(dǎo)的TNFα、IL-1β、COX2和iNOS

7、mRNA表達的抑制作用（P＞0.05）。
　?。?）RU486能夠阻斷Rg1對LPS誘導(dǎo)的炎癥因子限速酶COX2和iNOS蛋白表達的抑制作用（P＜0.01，P＜0.001）。
　　（6）GPER阻斷劑G15（1μM）能夠阻斷Rg1對LPS誘導(dǎo)的TNFα、IL-1β、COX2和iNOS mRNA表達的抑制作用（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）。
　?。?）GPER特異性激動劑G1（1μM）能夠明顯抑制LPS誘

8、導(dǎo)的TNFα、IL-1β、COX2和iNOS mRNA的表達（P＜0.01, P＜0.001）。 G15不能阻斷G1在mRNA水平對TNFα、IL-1β和COX2表達的抑制的作用（P＞0.05），但可以阻斷iNOS的基因表達（P＜0.05）。
　?。?）G15能夠阻斷Rg1和G1對LPS誘導(dǎo)的COX2和iNOS的蛋白表達（P＜0.05，P＜0.01）。
　　2.人參皂苷Rg1促進星形膠質(zhì)細胞活化的實驗研究
　?。?）R

9、g1單獨作用星形膠質(zhì)細胞6,12,24和48h，可以時間依賴性調(diào)控GFAP、GDNF及c-fos mRNA的表達（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）。
　?。?）應(yīng)用GPER阻斷劑G15，可以阻斷Rg1在不同時間點對GFAP、GDNF及c-fos mRNA表達的調(diào)控（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）。
　?。?）Rg1單獨作用星形膠質(zhì)細胞30min，可以明顯增加ERK、CREB蛋白的磷酸化水平（P＜0.