三七皂苷Rg1的抗抑郁作用及其機(jī)制.pdf

1、抑郁癥是一組以顯著而持久的心境障礙為主要特征的綜合癥，已影響到全球17%的人口，在世界致殘性疾病中排行第四，對社會危害極大[1]。研究探討抑郁癥的發(fā)病機(jī)理和開發(fā)有效抗抑郁藥物十分必要，但目前臨床上應(yīng)用的抗抑郁藥多為化學(xué)合成類藥物，雖有一定效果，但使用周期長，毒副作用較多。因此，以傳統(tǒng)中藥為基礎(chǔ)開發(fā)藥效顯著且無副反應(yīng)的新型抗抑郁藥，正日益受到國內(nèi)外的強(qiáng)烈關(guān)注。
　　 三七皂苷Rg1是中國傳統(tǒng)中藥三七的重要活性成分之一。已有的研究表

2、明，該單體可以增加動物海馬中的腦源性營養(yǎng)因子含量，對抗腦缺血再灌注；具有抗疲勞和耐缺氧作用；能夠增強(qiáng)動物的學(xué)習(xí)記憶功能，故推測三七皂苷Rg1可能具有抗抑郁作用。
　　 本課題選用慢性溫和不可預(yù)測刺激動物模型，研究三七皂苷Rg1是否可以對抗抑郁，并通過放射性免疫測定、RT-PCR、HE 染色及WESTERN-BLOT 技術(shù)初步探討其作用機(jī)制。
　　 第一部分、三七皂苷Rg1的抗抑郁作用
　　 目的：評價三七皂苷Rg

3、1的抗抑郁作用。
　　 方法：采用昆明種雄性小鼠（3 周大小，15 g 左右）制作模型，共設(shè)七個組別。
　　 空白組給予生理鹽水，模型組給予生理鹽水，陽性對照組給予鹽酸丙米嗪（15 mg/kg），三七皂苷Rg1（用生理鹽水溶解）所用劑量分別為2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg，以腹腔注射途徑給藥，每組20只。構(gòu)建為期8 周的慢性中度應(yīng)激模型，于最后2 周開始每天分別按組別和體重給藥（1

4、0 ml/kg），給藥同時應(yīng)激照樣進(jìn)行。8 周結(jié)束之后進(jìn)行行為學(xué)測試，包括懸尾測試（TST）、強(qiáng)迫游泳測試（FST）和敞箱測試，采用盲法，各組平行進(jìn)行，測試均在上午進(jìn)行。
　　 結(jié)果：FST結(jié)果顯示，游泳絕望狀態(tài)下模型組小鼠的不動時間明顯高出正常組小鼠三倍以上，證明模型制造成功；與模型組相比，陽性丙米嗪組小鼠的不動時間明顯降低，與正常組差不多；三七皂苷Rg1 四個劑量組可以呈劑量依賴性的降低小鼠的不動時間，其中20 mg/Kg

5、劑量組的效應(yīng)與陽性組等同，具有統(tǒng)計學(xué)意義。TST結(jié)果顯示，模型組小鼠在懸尾狀態(tài)下的不動時間數(shù)值為正常組小鼠的兩倍以上，表明模型制造成功；陽性丙米嗪能有效的將不動時間降至正常組水平；三七皂苷Rg1 四個劑量組都有顯著的改善作用，且具有統(tǒng)計學(xué)意義。敞箱測試結(jié)果顯示，CMS 部分降低了昆明小鼠的自主活動性，15 mg/Kg 鹽酸丙米嗪，10 mg/Kg和20 mg/Kg 劑量的三七皂苷Rg1 有輕微的改善作用，2.5 mg/Kg和5 mg/K

6、g 劑量的三七皂苷Rg1作用不明顯。
　　 結(jié)論：在2.5～20 mg/Kg 劑量范圍內(nèi)，三七皂苷Rg1 具有抗抑郁作用。
　　 第二部分、三七皂苷Rg1 抗抑郁作用的機(jī)制
　　 目的：探討三七皂苷Rg1的抗抑郁作用機(jī)制。
　　 方法：8 周的CMS 造模給藥結(jié)束后，每組隨機(jī)取10只小鼠處死，分離海馬組織并儲存于-80℃?zhèn)溆茫幻拷M隨機(jī)取5只小鼠處死后取出全腦儲存于-80℃?zhèn)溆?，并斷頭取軀干血液，取上層血清

7、，儲存于-20℃?zhèn)溆?；每組隨機(jī)取3只小鼠麻醉，用4%多聚甲醛溶液（4℃）進(jìn)行心臟灌注、固定，分離海馬制作石蠟切片。使用DFM96型免疫γ計數(shù)器對CMS 實驗中各組小鼠的血清皮質(zhì)酮含量進(jìn)行測定；使用RT-PCR 技術(shù)手段檢測CMS 實驗中各組小鼠的海馬組織中腦源性營養(yǎng)因子（BDNF）的表達(dá)；通過HE染色觀察CMS和藥物對各組小鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)的影響；通過WESTERN-BLOT 技術(shù)檢測CMS 實驗中各組小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)一系列與抑郁相關(guān)的

8、蛋白表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：三七皂苷Rg1和丙米嗪能顯著逆轉(zhuǎn)由CMS 引起的動物海馬神經(jīng)元內(nèi)BDNFmRNA 水平的降低，20 mg/kg和10 mg/kg 劑量尤為明顯；在CMS作用下，模型組小鼠血清皮質(zhì)酮濃度遠(yuǎn)高于正常組，三七皂苷Rg1和丙米嗪均能逆轉(zhuǎn)它；HE 染色結(jié)果表明海馬確為三七皂苷Rg1的作用靶點，恢復(fù)CMS 引起神經(jīng)元形態(tài)改變；WESTERN-BLOT方法證實三七皂苷Rg1 確實能夠上調(diào)與抑郁癥相關(guān)的一系列蛋白，如