2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、高侵襲轉(zhuǎn)移是原發(fā)性肝癌(簡稱“肝癌”)重要的生物學(xué)特性,也是導(dǎo)致肝癌高死亡率的重要原因。然而,其發(fā)病機(jī)制并不明確,阻礙了肝癌的有效診治。近幾年研究表明,RhoGAP蛋白家族的許多成員,如p190RhoGAP、DLC1和ARHGAP在人肝癌組織中明顯上調(diào)。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),ARHGAP9基因在肝癌組織中明顯低表達(dá),且低表達(dá)患者相對于高表達(dá)患者預(yù)后差。ARHGAP9的高表達(dá)還抑制肝癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)信號通路的激活。由此我們推測,ARHGAP

2、9基因與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。
  人參皂苷Rg3是人參的重要組成部分,對多種惡性腫瘤均具有抑制作用。由于其顯著的抗癌療效,人參皂苷Rg3的單體已被開發(fā)成我國一類抗癌新藥—參一膠囊。實驗和臨床研究均已證實,人參皂苷Rg3在治療肝癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。然而,人參皂苷Rg3抗肝癌的作用機(jī)制研究并不深入,缺乏臨床治療依據(jù),限制了人參皂苷Rg3在臨床上的廣泛應(yīng)用。鑒于我們前期發(fā)現(xiàn),ARHGAP9與肝癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān),人參皂苷Rg3

3、抗肝癌是否與ARHGAP9基因相關(guān)值得深入探討。
  因此本課題的研究主要分為兩個部分:(1)分析ARHGAP9基因在肝癌生長及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用;(2)確定人參皂苷Rg3是否通過ARHGAP9基因抑制肝癌細(xì)胞的侵襲遷移。
  (一)ARHGAP9在肝癌生長轉(zhuǎn)移中的作用研究
  我們首先通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染和慢病毒感染構(gòu)建了ARHGAP9基因干擾的肝癌細(xì)胞株和過表達(dá)的肝癌細(xì)胞株。然后采用CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell

4、等一系列實驗檢測分析ARHGAP9基因干擾和過表達(dá)對肝癌細(xì)胞增殖、周期、凋亡、侵襲和遷移能力的影響。體內(nèi)實驗,通過腋下注射ARHGAP9過表達(dá)的HepG2肝癌細(xì)胞株建立裸鼠皮下成瘤模型,分析ARHGAP9對裸鼠皮下瘤生長情況的影響。取得的實驗結(jié)果如下:
  1、ARHGAP9在肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)
  6種肝癌細(xì)胞株中,ARHGAP9基因表達(dá)最高的是MHCC-97L細(xì)胞,其余5種細(xì)胞株中ARHGAP9基因的表達(dá)相對較低且相互之

5、間無顯著性差異。因此選擇MHCC-97L細(xì)胞進(jìn)行基因干擾研究,選擇HepG2和MHCC-97H細(xì)胞進(jìn)行基因過表達(dá)研究。
  2、干擾ARHGAP9基因?qū)Ω伟┘?xì)胞增殖、周期和凋亡的影響
  干擾ARHGAP9基因顯著促進(jìn)了MHCC-97L細(xì)胞增殖,抑制細(xì)胞凋亡,且S期細(xì)胞比率增加。
  3、過表達(dá)ARHGAP9基因?qū)Ω伟┘?xì)胞增殖、周期和凋亡的影響
  過表達(dá)ARHGAP9基因顯著抑制了HepG2和MHCC-97H細(xì)

6、胞增殖,促進(jìn)了細(xì)胞凋亡,并將細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期。
  4、ARHGAP9對肝癌細(xì)胞侵襲和遷移的影響
  干擾ARHGAP9基因顯著促進(jìn)了MHCC-97L細(xì)胞的遷移和侵襲,過表達(dá)ARHGAP9基因顯著抑制了HepG2和MHCC-97H細(xì)胞的遷移和侵襲。
  5、ARHGAP9對裸鼠肝癌生長的影響
  ARHGAP9過表達(dá)組腫瘤生長速度明顯低于對照組。從第24天開始,ARHGAP9過表達(dá)組腫瘤體積較對照組明顯

7、降低(p<0.05)。
  結(jié)論:我們的研究結(jié)果顯示,ARHGAP9基因高表達(dá)顯著抑制肝癌發(fā)展過程。
  (二)基于ARHGAP9的人參皂苷Rg3對肝癌細(xì)胞侵襲遷移的影響
  我們采用CCK-8、Transwell、PCR、Western blot以及基因干擾等實驗觀察不同濃度20(R)-Rg3對肝癌細(xì)胞侵襲遷移能力以及對細(xì)胞內(nèi)ARHGAP9表達(dá)的影響。取得的實驗結(jié)果如下:
  1、人參皂苷Rg3對肝癌細(xì)胞活力的

8、影響
  采用CCK-8實驗檢測不同濃度人參皂苷Rg3對肝癌細(xì)胞活力的影響。當(dāng)Rg3處理HepG2和MHCC-97L細(xì)胞24 h后,實驗組(1.25、2.5和5μg/mL)的細(xì)胞活力與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異。
  2、人參皂苷Rg3抑制肝癌細(xì)胞的侵襲遷移
  人參皂苷Rg3在濃度為1.25、2.5和5μg/mL時均顯著抑制了HepG2和MHCC-97L細(xì)胞的侵襲和遷移。
  3、人參皂苷Rg3提高肝癌細(xì)胞中ARH

9、GAP9的表達(dá)
  與對照組相比,人參皂苷Rg3(2.5和5μg/mL)顯著提高了HepG2和MHCC-97L細(xì)胞中ARHGAP9蛋白的表達(dá)。
  4、人參皂苷Rg3通過ARHGAP9抑制肝癌細(xì)胞侵襲遷移
  沉默ARHGAP9基因后顯著緩解了人參皂苷Rg3(2.5和5μg/mL)對HepG2和MHCC-97L細(xì)胞的抗侵襲遷移作用。
  結(jié)論:我們的研究結(jié)果顯示,人參皂苷Rg3可抑制肝癌細(xì)胞的侵襲遷移,且此過程與

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