人參皂甙Rg3聯合三氧化二砷對肝癌裸鼠抗腫瘤作用與機制.pdf

1、研究背景與目的:肝癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，隨著科技的發(fā)展，小肝癌的發(fā)現日益增多，但臨床上發(fā)現的肝癌大部分仍是中晚期，非手術治療成為重要的治療手段，中藥抗腫瘤的作用與機制正逐漸被現代醫(yī)學研究所揭示。任何抗癌藥單獨應用，療效總是有限的，通過過分提高劑量，可提高一定療效，但明顯增強藥物毒性，因此臨床多主張聯合用藥，其目的在于提高療效，減弱毒性，延緩或防止耐藥。三氧化二砷對肝癌細胞誘導凋亡的作用在實驗室已得到證實，也有用于中晚期肝癌的報

2、道。人參皂甙Rg3抗腫瘤作用主要為其具有抑制腫瘤新生血管形成，從而抑制腫瘤的生長和轉移。人參皂甙Rg3動物實驗進一步證實，能明顯提高正常小鼠和荷瘤小鼠的免疫功能，與化療藥合用有明顯的減毒增效作用，可延長荷瘤小鼠的生存期。本實驗研究人參皂甙Rg3聯合三氧化二砷對肝癌裸鼠移植瘤模型的抗腫瘤作用，并深入探討其抗腫瘤的機制，為將人參皂甙Rg3聯合三氧化二砷聯合應用于臨床治療肝癌，提供更堅實的實驗基礎和理論依據，為控制肝癌的復發(fā)、轉移、延長生存時

3、間，探索新的治療途徑。 方法(1)采用人肝癌Bel-7402細胞株，種植于32只雄性裸鼠皮下，隨機均分成8組：Rg3(5mg/kg，10mg/kg，20mg/kg)聯合三氧化二砷組，Rg3組(5mg/kg，10mg/kg，20mg/kg)，三氧化二砷組及對照組。實驗自腫瘤接種第3天開始，人參皂甙Rg3，隔日灌胃，共20次，三氧化二砷，每日腹腔內注射，連續(xù)28天，停藥一周后，脫頸處死，分別觀察裸鼠的生存質量及毒副反應，有無遠處轉移

4、，檢測腫瘤的重量，計算抑瘤率。 (2)采用羊抗兔免疫球蛋白-過氧化物酶二步法免疫組織化學法(PowerVisionTMTwo-StepHistostaining)，結合計算機圖像分析，檢測聯合用藥組，Rg3組，三氧化二砷組及對照組中，Bax，Bcl-2，PCNA，血管第Ⅷ因子在裸鼠肝癌移植瘤組織中的表達情況，并計數微血管密度(MVD)。 結果(1)觀察人參皂甙Rg3與三氧化二砷對荷瘤裸鼠生存質量及毒副反應的作用，本研究發(fā)

5、現，Rg3組裸鼠未見明顯的藥物毒副反應，生存質量最好，其次為聯合治療組，再次為對照組，而三氧化二砷組有藥物反應，生存質量較差，三氧化二砷組有1只死亡。本實驗中較為突出的表現是聯合治療組的毒副反應和生存質量明顯優(yōu)于三氧化二砷治療組，隨著人參皂甙Rg3濃度的增加，及作用時間的延長，聯合治療組裸鼠的生存質量顯著提高。 (2)形態(tài)學觀察發(fā)現：Rg3組，聯合用藥組腫瘤表面呈蒼白色，僅有少數幾條肉眼可見血管，而對照組及三氧化二砷組瘤體表面的

6、血管較多，在我們對腫瘤進行剝離時，可見Rg3組及聯合用藥組血供明顯減少，出血量少，并且隨著Rg3用藥濃度的增加，血供的減少更為明顯。對照組血供最為豐富，出血量多。 在光學顯微鏡下觀察，聯合治療組的裸鼠腫瘤具有多灶性大面積壞死區(qū)，而三氧化二砷組腫瘤僅有小面積壞死區(qū)，聯合治療組的腫瘤壞死情況明顯高于三氧化二砷組。 HE染色光鏡下觀察肝、肺，淋巴結等器官，各組均未見明顯遠處轉移。 (3)Rg3組抑瘤率隨著濃度的升高，呈

7、現一個逐漸升高的趨勢。Rg3組，三氧化二砷組，聯合組，平均瘤重明顯較對照組輕，差異有顯著性(P＜0.001)。三氧化二砷組抑瘤率高于Rg3組，但隨著Rg3濃度的升高，二者之間的差異明顯減??；聯合組平均瘤重最低，抑瘤率最高，其抑瘤作用高于三氧化二砷組，差異有顯著性(P＜0.05)。 (4)微血管密度(MVD)在裸鼠肝癌移植瘤組織中的表達，Rg3組，三氧化二砷組，聯合組明顯低于對照組，差異有顯著性(P＜0.001)。Rg3組高于三氧

8、化二砷組，差異有顯著性(P＜0.05)，Rg3組與聯合組無顯著差異(P＞0.05)。聯合組抑制新生血管生成的作用最強，聯合組作用高于三氧化二砷組，差異有顯著性(P＜0.05)。 (5)PCNA陽性細胞指數(PI)在裸鼠肝癌移植瘤組織中的表達，Rg3組PI低于對照組，差異有顯著性(P＜0.05)，隨著藥物濃度的升高，差異更加明顯。三氧化二砷組和聯合用藥組明顯低于對照組(P＜0.001)。三氧化二砷組PI低于Rg3組，差異有顯著性(

9、P＜0.05)，隨著Rg3藥物濃度的升高，差異逐漸減小。聯合組PI值最低，且與三氧化二砷組差異有顯著性(P＜0.05)。 (6)通過免疫組化監(jiān)測腫瘤組織中Bax，Bcl-2蛋白表達，來研究二者對移植瘤肝癌細胞凋亡的影響。本實驗顯示，對照組bax蛋白的表達強度最低，Bcl-2蛋白的表達強度最高，腫瘤處于一種不斷生長的趨勢。三氧化二砷組上調Bax，下調Bcl-2蛋白的表達，作用高于Rg3組，聯合組Bcl-2值最低，Bax值最高，隨著

10、Rg3藥物濃度的升高，聯合組的效果更為明顯。 結論1.本實驗結果顯示，人參皂甙Rg3具有顯著的抑制腫瘤新生血管形成的作用，其抑制腫瘤生長可能主要是通過抑制腫瘤血管生成來實現的，而三氧化二砷對腫瘤血管生成抑制作用較Rg3弱，作為抗腫瘤藥，主要通過誘導肝癌細胞的凋亡，抑制肝癌細胞的增殖，來抑制腫瘤生長。 2.本實驗證明，在裸鼠體內實驗中，人參皂甙Rg3與三氧化二砷聯合應用，可以顯著的抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生長，其主要作用機制