20（R）—人參皂甙Rg3對(duì)小鼠免疫功能的影響.pdf

1、前言:本文以正常和荷瘤小鼠為模型，以中藥提取物人參皂甙Rg3為受試藥，灌胃(ig)給藥后，觀察人參皂甙Rg3對(duì)小鼠免疫功能的影響，以期對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 方法:以昆明種小鼠為研究對(duì)象，設(shè)為正常動(dòng)物模型和荷瘤小鼠模型兩部分。用正常動(dòng)物模型檢測(cè)免疫器官重量、巨噬細(xì)胞功能和遲發(fā)型超敏反應(yīng)。40只小鼠(♀♂各半)按體重隨機(jī)分為4組，分別為空白對(duì)照及人參皂甙Rg33、6、12mg/kg體重3個(gè)劑量組。用2﹪淀粉溶液配制成混懸液，灌

2、胃(ig)給藥，ig容積為10ml/kg體重，對(duì)照組ig給予等容積淀粉溶液。每天一次，連續(xù)給藥10天后，檢測(cè)脾臟與胸腺重量及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的功能。另取40只小鼠(早♀♂各半)，按體重隨機(jī)分為4組，分別為空白對(duì)照及人參皂甙Rg33個(gè)劑量組(劑量同前)。40只小鼠均以濃度為4mg/ml的二硝基氟苯(DNFB)0.125ml涂于小鼠腹部去毛皮膚(3×3cm)，使小鼠致敏，對(duì)照組ig給予2﹪淀粉溶液，人參皂甙Rg33個(gè)劑量組ig給予人

3、參皂甙Rg3。ig容量為10ml/kg體重。每天一次，連續(xù)給藥7天，最后一次給藥后次日，以同濃度DNFB0.05ml均勻涂抹于小鼠右耳(兩面)進(jìn)行攻擊，攻擊后24h，頸椎脫臼處死動(dòng)物，取耳片。通過(guò)計(jì)算腫脹度觀察遲發(fā)型超敏反應(yīng)。用荷瘤小鼠模型檢測(cè)對(duì)荷瘤小鼠NK活性、IL-2活性的影響及對(duì)荷瘤小鼠脾臟細(xì)胞增殖反應(yīng)影響。首先制備荷瘤小鼠模型，將荷肉瘤S180小鼠腹腔瘤液與無(wú)菌生理鹽水混合(1∶3)，經(jīng)小鼠右腋部皮下注射上述瘤液0.2ml/鼠。

4、50只小鼠(♀♂各半)按體重隨機(jī)分為5組。分別為對(duì)照組、環(huán)磷酰胺(Cyc)組和人參皂甙Rg33個(gè)劑量組(劑量同前)。對(duì)照組ig給予2﹪淀粉溶液，每天一次；Cyc組ig給予2﹪淀粉溶液，給藥開(kāi)始第一天腹腔內(nèi)注射(ip)Cyc200mg/kg體重(ip容量為10ml/kg體重)一次；人參皂甙Rg3的3個(gè)劑量組于給藥開(kāi)始第一天ipCyc200mg/kg體重一次，并ig給予不同劑量人參皂甙Rg3，每天一次，連續(xù)7天。給藥結(jié)束后次日處死動(dòng)物。無(wú)菌

5、條件下制備脾細(xì)胞懸液，并調(diào)整濃度為2.5×106/mL，以體外建株淋巴瘤細(xì)胞系YAC-1為靶細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/mL，各取0.1mL加入96孔板，E∶T為25∶1。在37℃，含5﹪CO2潮濕空氣的培養(yǎng)箱中孵育20h。用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖反應(yīng)，計(jì)算NK細(xì)胞活性。IL-2活性試驗(yàn)需先制備IL-2。調(diào)整脾細(xì)胞濃度為5×106/mL，加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1mL，并加100μl伴刀豆球蛋白A(ConA)，在37℃，含5﹪CO2潮

6、濕空氣的培養(yǎng)箱中孵育48h后，取上清離心，獲得IL-2粗制品，-20℃保存。取體重20g的雌雄小鼠各兩只，斷椎處死，無(wú)菌制備胸腺細(xì)胞懸液5×106/mL，每mL細(xì)胞懸液加ConA2μg，混勻，取0.1mL加入96孔板。然后將小鼠IL-2粗制品加入各孔，每孔100μl，每個(gè)樣品作3個(gè)復(fù)孔。在37℃，含5﹪CO2潮濕空氣的培養(yǎng)箱中孵育68h后，用MTT法測(cè)試細(xì)胞的OD值，間接反應(yīng)受試藥物對(duì)IL-2的誘導(dǎo)能力。脾臟細(xì)胞增殖反應(yīng)是取0.1mL2

7、×106/mL的脾細(xì)胞懸液，加至96孔板，再加T細(xì)胞有絲分裂原ConA1.5μg/孔或B細(xì)胞有絲分裂原脂多糖(LPS)4μg/孔。每只動(dòng)物脾細(xì)胞做3個(gè)平行空，在37℃，含5﹪CO2潮濕空氣的培養(yǎng)箱中孵育68h后，用MTT法比色檢測(cè)。細(xì)胞增殖反應(yīng)以O(shè)D值和ConA刺激指數(shù)(SI)表示。 結(jié)論:人參皂甙Rg3經(jīng)口給藥后，能明顯提高正常小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能及胸腺系數(shù)，并可明顯提高荷瘤小鼠的脾細(xì)胞對(duì)LPS的增殖反應(yīng)，提示人參皂甙Rg3對(duì)