人參皂甙Rg3治療食管癌分子機(jī)制的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、人參皂甙Rg3是從人參中提取的中藥單體，研究表明人參皂甙Rg3具有抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移等作用，Rg3抗腫瘤機(jī)理的研究是目前中草藥抗腫瘤研究的熱點(diǎn)之一。
　　本研究主要包括:
　　(1)利用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)測定人參皂甙Rg3對人食道癌EC9706細(xì)胞的生長抑制作用;采用免疫組化、RT-PCR和Westen-blot等方法分析人參皂甙Rg3對細(xì)胞周期蛋白p21、p27、c-Myc、PCNA和Cyclin-D1等表達(dá)

2、的影響，探討人參皂甙Rg3抑制EC9706細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。
　　(2)采用AO/EB雙染色和流式細(xì)胞術(shù)觀察分析Rg3對EC9706細(xì)胞凋亡的影響，利用免疫組化、RT-PCR和Westen-blot等方法分析人參皂甙Rg3對細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-xL、p53、Fas和caspase-3表達(dá)的影響，探討人參皂甙Rg3促EC9706細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。
　　(3)采用原代培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Humanumbili

3、calveinendothelialcells，HUVECs)，利用MTT、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell小室、小管形成等方法觀察Rg3對HUVECs的增殖、遷移、侵襲等方法，研究人參皂苷Rg3體外的抗血管生成作用。
　　(4)利用免疫細(xì)胞化學(xué)、RT-PCR、Westem-blot等方法，對人參皂甙Rg3作用后EC9706食道癌細(xì)胞中血管生成相關(guān)分子MMP-2、MMP-9和VEGF的表達(dá)進(jìn)行研究，探討Rg3對食道癌新生血管抑制的作

4、用機(jī)制。
　　結(jié)果顯示:
　　(1)50μmol/L人參皂甙Rg3即能抑制食管癌細(xì)胞EC9706的增殖，并且有時(shí)間和劑量依賴性，人參皂甙Rg3作用后EC9706細(xì)胞中G0/G1期細(xì)胞數(shù)目依濃度遞增逐漸增加，而S期和G2/M期細(xì)胞數(shù)目則依濃度增加而逐漸減少。Rg3作用后，Cyclin-D1和PCNA表達(dá)水平皆降低，p21和p27蛋白水平增高，p21蛋白的增高更明顯。
　　(2)200μmol/L、100μmol/L、50

5、μmol/L的Rg3對EC9706細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示，作用48h后EC9706細(xì)胞凋亡百分?jǐn)?shù)分別為35.19％，15.48％，8.16％，與對照組相比均有顯著性差異，(P＜0.01)，細(xì)胞凋亡率隨Rg3濃度的增加而增加。Bax隨著Rg3濃度的增加，表達(dá)量增加，Bcl-2變化不明顯，Bcl-xL表達(dá)量減弱，Caspase-3、p53、Fas等表達(dá)量也隨濃度增加而增加。
　　(3)Rg3處理后可使HUVECs細(xì)胞形態(tài)改變，200μmo

6、l/L時(shí)人參皂苷Rg3對HUVECs增殖有明顯的抑制作用，50μmol/L時(shí)可抑制HUVECs細(xì)胞遷移，Rg3處理組與對照相比，HUVECs細(xì)胞形成的典型的微觀樣結(jié)構(gòu)數(shù)目明顯減少，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。
　　(4)免疫組化顯示100μmol/L、200μmol/LRg3組VEGF在EC9706細(xì)胞中分別呈弱陽性和陰性，人參皂甙Rg3均能降低EC9706細(xì)胞MMP-2的表達(dá)水平，200μmol/L時(shí)能顯著的抑制MMP-2的表達(dá)，并

7、呈劑量依賴關(guān)系。
　　本研究表明:
　　(1)人參皂甙Rg3能夠抑制食管癌細(xì)胞EC9706的增殖，主要是將食管癌細(xì)胞阻滯在G0/G1期，其分子機(jī)制可能通過上調(diào)p21蛋白表達(dá)水平，而下調(diào)c-Myc和Cyclin-D1蛋白來實(shí)現(xiàn)細(xì)胞增殖抑制作用的。
　　(2)人參皂苷Rg3可誘導(dǎo)人食道癌EC9706細(xì)胞發(fā)生凋亡，凋亡率隨Rg3濃度增加而增加，其機(jī)理為Rg3能上調(diào)Bax、p53和Caspase-3蛋白表達(dá)水平，而促使腫瘤細(xì)胞

8、凋亡。
　　(3)Rg3能顯著抑制HUVECs細(xì)胞的增殖、遷移和小管形成，表明Rg3能抑制新生血管形成，具體的作用機(jī)理有待進(jìn)一步深入研究。Rg3有望成為新型的抗血管生成的中草藥單體成分。
　　(4)人參皂甙Rg3可能通過下調(diào)食道癌細(xì)胞EC9706中VEGF和MMP-2、MMP-9的表達(dá)，從而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，抑制腫瘤血管生成。
　　本文從Rg3對人食道癌EC9706細(xì)胞細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和抗腫瘤血管生成等方