Gab2激活乳腺癌干細胞機制及其在HER2引起的耐藥中的作用.pdf

1、目的:人類表皮生長因子受體2（Human epidermal growth factor receptor2，HER2）是表皮生長因子受體家族(EGFR)的成員之一。在乳腺癌患者中，約有20％-30％存在HER2基因擴增或異常表達現(xiàn)象，在侵襲性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中，HER2的作用更加明顯。據(jù)研究報道，HER2是乳腺癌的重要調(diào)控因素，不僅與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，同時還參與調(diào)控腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移過程。HER2過表達不僅與乳腺癌患者的不良預(yù)后相

2、關(guān)，同時還與患者對治療藥物的耐受性存在一定的相關(guān)性。近年來，HER2基因或蛋白已成為判斷乳腺癌患者預(yù)后的一個重要的標(biāo)志物，同時也是分子靶向治療的重要靶點。然而，有部分患者在接受HER2靶向藥物治療后出現(xiàn)耐藥或復(fù)發(fā)現(xiàn)象。Grb2結(jié)合蛋白2(Grb2-associated binding protein2，Gab2)是Gabs蛋白家族(Grb2-associated binder family proteins)的一員，該蛋白家族屬于支架蛋

3、白，在進化的過程中高度保守。Gab2在多種腫瘤中都存在表達上調(diào)的現(xiàn)象，其中包括乳腺癌。支架蛋白在信號的傳遞過程中起重要的作用，磷酸化的Gab2可以介導(dǎo)許多細胞內(nèi)信號通路的活性，比如PI3K/AKT和MAPK/ERK信號通路。我們的研究發(fā)現(xiàn)，Gab2的表達水平在HER2過表達的乳腺癌細胞中顯著升高;敲低Gab2后，PI3K/AKT信號通路和MAPK/ERK信號通路的活性下降，并且細胞的增殖能力也顯著降低。在HER2過表達的細胞中敲低Gab

4、2，還能夠緩解HER2過表達的乳腺癌細胞對他莫昔芬(tamoxifen，TAM)的耐受性。更重要的是，我們發(fā)現(xiàn)，敲低Gab2還明顯抑制乳腺癌細胞的干性。我們首次發(fā)現(xiàn)在HER2過表達的乳腺癌中，Gab2是一個重要的乳腺癌干細胞(Breast cancer stem cells，BCSCs)的調(diào)控因素。因此，實驗結(jié)果表明Gab2很有可能是HER2過表達乳腺癌的一個分子標(biāo)志物。
　　方法:(1)利用Real-time PCR、免疫印記等

5、實驗技術(shù)檢測T47D-control，T47D-HER2細胞中HER2和Gab2 mRNA和蛋白的表達水平。(2)利用免疫印記、克隆形成和MTT實驗技術(shù)檢測Gab2敲低后細胞的生長曲線以及對細胞增殖能力的影響。(3)利用成球?qū)嶒?、Real-time PCR、免疫印記等實驗技術(shù)檢測敲低Gab2對乳腺癌細胞干性的影響。(4)建立動物模型，驗證敲低Gab2對腫瘤生長的影響。(5)利用MTT和克隆形成實驗技術(shù)檢測細胞經(jīng)過他莫昔芬處理后的存活率。

6、
　　結(jié)果:(1)在T47D-HER2細胞中，Gab2的mRNA水平和蛋白水平均高于T47D-control細胞。(2)在T47D-HER2細胞中敲低Gab2后，HER2下游PI3K/AKT和MAPK/ERK信號通路的活性降低，同時細胞的增殖能力也有所下降。(3)敲低Gab2，乳腺癌細胞的干性也隨之降低，成球能力下降，干性相關(guān)基因的表達水平降低。說明Gab2在調(diào)控乳腺癌細胞的干性過程中起到了非常關(guān)鍵的作用。(4)體內(nèi)實驗證明，在T