花生四烯酸代謝促進乳腺癌細胞增殖和遷移信號轉導途徑的研究.pdf

1、摘要摘要乳腺癌轉移是造成患者死亡的主要原因之一。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，花生四烯酸(ArachidonicAcidAA)代謝可能與乳腺癌細胞高增殖和遷移的作用密切相關。本研究針對花生四烯酸代謝與上述高轉移乳腺癌細胞增殖和遷移信號通路的關系進行了深入細致的研究。我們首先應用蛋白質組學方法對MCF7與LMMCF7細胞之間差異表達的蛋白進行了檢測。經二維電泳、質譜分析檢測后，發(fā)現(xiàn)了8個有意義的蛋白質點，其中甘油磷酸激酶1(phosphoglyc

2、eratekinase1)磷酸甘油醛異構酶(triosephosphateisomerase)、烯醇酶(enolase)和磷酸甘油酸變位酶(phosphoglyceratemutase)等四個蛋白與細胞的糖代謝途徑有密切的關系。文獻報道花生四烯酸代謝是糖代謝的重要組成部分，上述結果從蛋白水平上提示從代謝可能與乳腺癌轉移相關。因此，我們進一步研究了從代謝與高轉移乳腺癌細胞增殖和遷移信號途徑GioPLCPKCERK12MLCK加MLC的關系

3、。我們實驗室發(fā)現(xiàn)，pERK12是上述乳腺癌細胞高增殖和遷移相關信號途徑的關鍵信號因子，為此本研究進一步應用免疫印跡驗證了PERK12在LMMCF7MDAMB231及MCF7細胞中表達的差異。結果顯示，與低轉移的乳腺癌細胞系MCF7細胞相比，pERK12的水平在高轉移的乳腺癌細胞系LMMCF7和MDAMB231中明顯增高。為了進一步研究AA代謝與LMMCF7細胞高轉移的關系，我們通過Westernblot實驗，分別檢測了cPLA2COXL

4、OX和P450的抑制劑AACOCF3Indomethacin(Indo)NDGA和SKF525A對LMMCF7細胞中pERK12水平的影響。結果顯示，與AA釋放有關的cPLA2及COX和LOX抑制劑可明顯下調LMMCF7細胞中pERKI2的水平，表明AA代謝相關的cPLA2COX和LOX與上述乳腺癌高增殖和遷移信號途徑相關應用RTPCR和免疫印跡實驗對LMMCF7和MDAMB231與MCF7細胞進行比較，結果發(fā)現(xiàn)高轉移細胞中cPLA2C

5、OX2以及5LOX的mRNA水平和蛋白水平的表達明顯上調，進一步證實了上述結果。文獻報道Gi。和pERK12可以激活cPLA2，從而促進AA的釋放和代謝。為了研究上述GioPLCPKCpERK12信號途徑是否與促進AA的釋放和代謝有關，我們分別應用上述各信號的抑制劑PTXCalphostinC和PD98059作用LMMCF7細AbstractAbstractMetastasisisoneofthereasonsofdeathofbrea

6、stcancerpatient.Ourlaboratorypreviouslyfoundthatarachidonicacidanditsmetabolites~closelyrelatedtotheabilityofhighproliferationandhighmetastasisofbreastcancercellswithighmetastasispotential.Inthisstudyweinvestigatedthesig

7、naltransductionpathwaysinvolvedinarachidonicacidanditsmetabolitesresultedinhighproliferationandhighmetastasisofbreastcancercells.FirstlyweusedproteomicsmethodstoinvestigatetheexpressionofdiferentproteinsbetweenLMMCF7andM

8、CF7cells.Twodimensionalelectrophoresesandmassspectrumresultsshowedthat8proteinsweresignificant.Ineightproteinsphosphoglyceratekinase1triosephosphateisomeraseenolaseandphosphoglyceratemutaseareallcloserelativetoglycolytic

9、signaltransductionpathways.Manypapersreportedthatarachidonicacidmetaboliteswereaveryimportantpartofglycolyticsignaltransductionpathways.Theseresultswerecuetousfurtherthatarachidonicacidmetaboliteswereprobablycloserelativ

10、e.tohighproliferationandmetastasissignaltransductionpathwayofLMMCF7cells.SowefurtherinvestigatedtherelationshipbetweenarachidonicacidmetabolitesandhighproliferationandmetastasissignaltransductionpathwayofLMMCF7cellsGioPL

11、CPKCERKI2MLCKpMLC.pERKI2isamainlycriticalsignalfactorinhighproliferationandmetastasissignaltransductionpathwayofLMMCF7cells.SoweinvestigatetheexpressionallevelofpERKI2inLMMCF7MCF7andMDAMB231cells.Westernblotresultsshowed

12、pERKI2expressionallevelisobviouslyhigherinLMMCF7andMCF7cellsthaninMCF7cells.InordertofurtherinvestigatetherelationshipofarachidonicacidmetabolitesandhighproliferationandmetastasissignaltransductionpathwayofLMMCF7cellswee