DADS經(jīng)p38-TTP途徑抑制乳腺癌細胞侵襲遷移的研究.pdf

1、目的：觀察大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)對 MCF-7和MDA-MB-231兩種人乳腺癌細胞侵襲遷移的影響，探討p38/TTP是否參與DADS對乳腺癌調(diào)節(jié)這一機制，為乳腺癌的分子靶向治療提供新的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.分別用不同濃度(50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L,600μmol/L)的DADS處理MCF-7和MDA-MB-231細胞，平板克隆法觀察 DADS對細胞克

2、隆形成能力的影響。
　　2.篩選100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L DADS處理兩種乳腺癌細胞，Transwell侵襲及劃痕愈合實驗檢測DADS對乳腺癌細胞侵襲遷移的影響，western blot檢測侵襲遷移相關(guān)蛋白uPA、MMP9以及p38、P-p38和TTP的表達變化。進一步采用200μmol/L DADS分別處理兩種細胞6,12,24和48h，進行上述western blot檢測。
　　3.選擇

3、DADS處理兩種乳腺癌細胞的濃度和時間分別為200μmol/L和24h，運用SB203580和TGF-β1調(diào)節(jié)p38信號，Transwell和劃痕愈合實驗觀察調(diào)節(jié)p38信號對DADS抑制細胞侵襲遷移的影響，western blot檢測uPA、MMP9、p38、P-p38、TTP表達的變化，免疫熒光法觀察P-p38表達改變。
　　4.TTP siRNA轉(zhuǎn)染細胞沉默TTP表達，Transwell和劃痕愈合實驗觀察DADS對細胞侵襲遷移

4、能力的改變，western blot檢測TTP、uPA和MMP9表達的變化。
　　結(jié)果：
　　1.平板克隆結(jié)果顯示，DADS可抑制兩種乳腺癌細胞克隆的形成，進而篩選100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L DADS處理兩種乳腺癌細胞。
　　2.Transwell及劃痕愈合實驗表明，隨著處理濃度的增加，DADS抑制細胞侵襲遷移的能力逐漸增強。Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DADS可下調(diào)侵襲遷移相關(guān)蛋

5、白uPA、MMP9的表達，且下調(diào)P-p38，上調(diào)TTP表達，均具有濃度和時間依賴性。
　　3.用TGF-β1預(yù)處理細胞上調(diào)P-p38表達，可延緩DADS對乳腺癌細胞侵襲遷移的抑制作用和對TTP表達的上調(diào)效果；而p38阻斷劑SB203580預(yù)處理細胞，則可加強DADS的上述作用。
　　4. TTP siRNA可沉默TTP表達，延緩DADS的上述作用。
　　結(jié)論：
　　1. DADS抑制MCF-7和MDA-MB-23