DADS經(jīng)p38-TTP途徑抑制乳腺癌細(xì)胞侵襲遷移的研究.pdf

1、目的：觀察大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)對(duì) MCF-7和MDA-MB-231兩種人乳腺癌細(xì)胞侵襲遷移的影響，探討p38/TTP是否參與DADS對(duì)乳腺癌調(diào)節(jié)這一機(jī)制，為乳腺癌的分子靶向治療提供新的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.分別用不同濃度(50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L,600μmol/L)的DADS處理MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞，平板克隆法觀察 DADS對(duì)細(xì)胞克

2、隆形成能力的影響。
　　2.篩選100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L DADS處理兩種乳腺癌細(xì)胞，Transwell侵襲及劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DADS對(duì)乳腺癌細(xì)胞侵襲遷移的影響，western blot檢測(cè)侵襲遷移相關(guān)蛋白u(yù)PA、MMP9以及p38、P-p38和TTP的表達(dá)變化。進(jìn)一步采用200μmol/L DADS分別處理兩種細(xì)胞6,12,24和48h，進(jìn)行上述western blot檢測(cè)。
　　3.選擇

3、DADS處理兩種乳腺癌細(xì)胞的濃度和時(shí)間分別為200μmol/L和24h，運(yùn)用SB203580和TGF-β1調(diào)節(jié)p38信號(hào)，Transwell和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)觀察調(diào)節(jié)p38信號(hào)對(duì)DADS抑制細(xì)胞侵襲遷移的影響，western blot檢測(cè)uPA、MMP9、p38、P-p38、TTP表達(dá)的變化，免疫熒光法觀察P-p38表達(dá)改變。
　　4.TTP siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞沉默TTP表達(dá)，Transwell和劃痕愈合實(shí)驗(yàn)觀察DADS對(duì)細(xì)胞侵襲遷移

4、能力的改變，western blot檢測(cè)TTP、uPA和MMP9表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.平板克隆結(jié)果顯示，DADS可抑制兩種乳腺癌細(xì)胞克隆的形成，進(jìn)而篩選100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L DADS處理兩種乳腺癌細(xì)胞。
　　2.Transwell及劃痕愈合實(shí)驗(yàn)表明，隨著處理濃度的增加，DADS抑制細(xì)胞侵襲遷移的能力逐漸增強(qiáng)。Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DADS可下調(diào)侵襲遷移相關(guān)蛋

5、白u(yù)PA、MMP9的表達(dá)，且下調(diào)P-p38，上調(diào)TTP表達(dá)，均具有濃度和時(shí)間依賴性。
　　3.用TGF-β1預(yù)處理細(xì)胞上調(diào)P-p38表達(dá)，可延緩DADS對(duì)乳腺癌細(xì)胞侵襲遷移的抑制作用和對(duì)TTP表達(dá)的上調(diào)效果；而p38阻斷劑SB203580預(yù)處理細(xì)胞，則可加強(qiáng)DADS的上述作用。
　　4. TTP siRNA可沉默TTP表達(dá)，延緩DADS的上述作用。
　　結(jié)論：
　　1. DADS抑制MCF-7和MDA-MB-23