敲低PES1基因表達抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的侵襲和遷移.pdf

1、背景：近幾十年來，癌癥在我國的發(fā)病率一直處于上升趨勢，肺癌、乳腺癌、前列腺癌尤為突出。乳腺癌已成為威脅女性健康最重要的疾病之一。隨著科技的進步，對于乳腺癌的篩查及診治有了長足的進步，然而其病死率仍然沒有得到有效控制。影響乳腺癌治療的因素有很多，特別是癌細(xì)胞的易轉(zhuǎn)移性和侵襲能力影響治療效果。通過淋巴管和血管等途徑，腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移至腦、肺、肝等組織和器官，產(chǎn)生轉(zhuǎn)移灶，導(dǎo)致乳腺癌患者死亡。
　　研究發(fā)現(xiàn)，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelia

2、l-Mesenchymal Transition，EMT)過程在腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲中作用重大。EMT是指上皮細(xì)胞通過特定程序向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的生物過程，在胚胎發(fā)育、慢性炎癥、組織重塑、癌轉(zhuǎn)移中起重要作用。其特點是細(xì)胞黏附分子表達減少、細(xì)胞角蛋白轉(zhuǎn)化成波形蛋白（Vimentin）及細(xì)胞骨架和形態(tài)上具有間充質(zhì)細(xì)胞的特征等。在EMT的過程中，上皮細(xì)胞失去細(xì)胞極性，損失與基底膜連接等上皮樣表型，獲得了較高的遷移與侵襲等間充質(zhì)細(xì)胞表型。

3、　　PES1基因是在逆轉(zhuǎn)錄病毒誘發(fā)斑馬魚胚胎發(fā)育缺陷的研究中發(fā)現(xiàn)的。研究表明，PES1在核糖體生成、細(xì)胞周期和細(xì)胞增殖中有著重要作用。它是一種在乳腺癌細(xì)胞中高表達的基因，主要通過調(diào)控類固醇激素信號傳導(dǎo)途徑中的雌激素受體α(ERα)和雌激素受體β(ERβ)發(fā)揮作用，它能夠增強ERα穩(wěn)定性，減少ERβ表達。在ER陽性的乳腺癌中，PES1調(diào)節(jié)雌激素受體α和雌激素受體β之間的平衡，影響乳腺癌的發(fā)生發(fā)展進程。在ER陰性的乳腺癌細(xì)胞中，PES1促進

4、細(xì)胞的增殖，發(fā)揮一種癌基因的作用。到目前為止，尚不清楚PES1是否影響腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。
　　目的：
　　建立穩(wěn)定表達PES1 shRNA及陰性對照PES1 shRNA con的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞系，研究敲低PES1基因表達對細(xì)胞遷移及侵襲的影響。
　　方法：
　　1.設(shè)計合成PES1基因的siRNA引物，克隆到pSHI1-H1-Puro載體上;經(jīng)過慢病毒的包裝，測定病毒滴度;感染人乳腺癌MDA-

5、MB-231細(xì)胞，建立敲低PES1基因表達的MDA-MB-231穩(wěn)定細(xì)胞系;采用RT-qPCR和Western Blot方法檢測PES1在mRNA和蛋白質(zhì)水平的變化;
　　2.利用細(xì)胞劃痕實驗觀察細(xì)胞遷移能力的變化;
　　3.利用Transwell實驗檢測PES1對細(xì)胞侵襲能力的影響。
　　結(jié)果和結(jié)論：
　　利用敲低PES1基因表達的慢病毒載體，建立了PES1 shRNA的MDA-MB-231的穩(wěn)定克隆細(xì)胞系，觀