尼美舒利對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖抑制的實驗研究.pdf

1、目的：研究尼美舒利(nimesulide，NIM)在體外對人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231生長抑制和誘導(dǎo)凋亡的作用，及聯(lián)合赫塞汀(Herceptin)的協(xié)同作用，并對其機(jī)制做進(jìn)一步探討。 方法：以不同濃度的尼美舒利溶液(50、100、200、400μmol/L)處理對數(shù)生長期的人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞，應(yīng)用MTT比色法檢測OD值，計算對照組和各實驗組MDA-MB-231細(xì)胞的抑制率，并篩選最適宜的尼美舒利IC50；應(yīng)用

2、流式細(xì)胞技術(shù)對NIM作用后的MDA-MB-231細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期分析，計算細(xì)胞凋亡率；免疫組化法檢測MDA-MB-231細(xì)胞中Bel-2、Bax、Cox-2蛋白表達(dá)的變化；RT-PCR半定量檢測MDA-MB-231細(xì)胞COX-2 mRNA及C-erbB-2 mRNA的表達(dá)水平，以研究NIM誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞凋亡的機(jī)制及NIM與Herceptin協(xié)同作用的機(jī)制；用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液上清中PGE2水平的變化。 結(jié)果

3、 MTT法顯示尼美舒利可明顯抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞生長并具有濃度、時間依賴性，NIM濃度為200μmol/L作用48h的抑制率約為51.3％；流式細(xì)胞技術(shù)檢測顯示亞二倍體亞G1峰-凋亡峰(AP峰)，定量分析顯示，濃度為50、100、200、400μmol/L的尼美舒利作用48h后誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生的凋亡率分別為6.94±1.02％，12.10±1.51％,30.27±1.98％，38.27±3.03％，與陰性對照組相比，有顯著差

4、異(P<0.05)。細(xì)胞周期分析顯示，隨著藥物濃度的增高，處于G1/G0期細(xì)胞比例上升，S期及G2期細(xì)胞比例下降；免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，對照組細(xì)胞胞漿內(nèi)可見大量棕黃色顆粒，染色較深，提示COX-2和Bel-2蛋白高表達(dá)，尼美舒利濃度逐漸增加處理48h后觀察，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，表達(dá)棕黃色顆粒的細(xì)胞數(shù)逐漸減少，且染色也逐漸減淡，提示在尼美舒利作用下，COX-2和Bcl-2蛋白的表達(dá)逐漸下降，而Bax蛋白表達(dá)水平隨著作用藥物濃度增加，產(chǎn)生棕黃色

5、顆粒的陽性細(xì)胞逐漸增多；尼美舒利處理MDA-MB-231細(xì)胞48h后，RT-PCR檢測結(jié)果提示腫瘤細(xì)胞COX-2mRNA及C-erbB-2mRNA的表達(dá)呈濃度依賴性降低：NIM與Hereeptin聯(lián)合作用后，COX-2mRNA及C-erbB-2mRNA的表達(dá)水平明顯下降；細(xì)胞培養(yǎng)液上清中PGE2濃度下降了57.2％。結(jié)論尼美舒利可明顯抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖，且呈時間、劑量依賴性。尼美舒利抗腫瘤的作用機(jī)制除了其對COX-