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文檔簡介
1、目的:探討ECMS對體外培養(yǎng)的MDA-MB-231細胞增殖、凋亡及凋亡相關基因蛋白表達的影響。
方法:體外培養(yǎng)MDA-MB-231細胞,選擇不同濃度含藥培養(yǎng)基與MDA-MB-231細胞共同孵育48h后,應用倒置顯微鏡觀察細胞生長狀況,應用熒光顯微鏡觀察Hoechst染色后凋亡細胞形態(tài)變化,采用MTT法檢測ECMS對細胞的抑制率、PI/AnnexinV-FITC雙染檢測細胞凋亡、westernblot法檢測相關信號轉導通路以
2、及凋亡相關基因的表達。
結果:經MTT實驗測定,ECMS各濃度對乳腺腺癌MDA-MB-231細胞的增殖有顯著的抑制作用,呈良好的量效、時效關系。ECMS對MDA-MB-231細胞IC50是65μg/ml在72h。我們選用了0,0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.4mg/ml四組作為本實驗的四個劑量組,作用時間為48h。Hoechst染色后在熒光顯微鏡下可檢測到對照組正常細胞的細胞核呈正常的藍色彌散均勻熒光,凋亡細胞的細
3、胞核會呈致密濃染,或呈碎塊狀致密濃染,甚至可見DNA熒光碎片,隨濃度增加每視野下的凋亡細胞增加。PI/AnnexinV-FITC雙染,流式細胞儀下檢測細胞凋亡率,ECMS可以誘導MDA-MB-231細胞凋亡,并隨著藥物濃度的增大,凋亡細胞的數量逐漸增加。
Westernblot顯示ECMS劑量增加可下調PI3K/AKT和NF-κB信號通路的基因蛋白表達。ECMS處理MDA-MB-231細胞會導致Cdk1和CyclinB1表
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