丙本睪丸酮對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231增殖影響的研究.pdf

1、目的:近年來，乳腺癌已經(jīng)成為威脅女性生命與健康的頭號“公敵”。雖然經(jīng)過系統(tǒng)、正規(guī)的綜合治療使乳腺癌的生存率大大提高，但仍有一些特殊類型如三陰性乳腺癌生存獲益不太顯著。我們把ER、PR和HER-2均為陰性的乳腺癌定義為三陰性乳腺癌。由于缺乏有效的靶向藥物，治療三陰性乳腺癌的方法很少，復(fù)發(fā)率較高[1]。雌孕激素及其受體在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展甚至是治療方面都起著至關(guān)重要的作用?？勾萍に匾恢笔侵饕膬?nèi)分泌治療方向。而關(guān)于雄激素及雄激素受體在乳腺癌治

2、療方面的研究卻鮮有報導(dǎo)。雄激素是前列腺癌發(fā)生發(fā)展的主要原因，研究發(fā)現(xiàn)二氫睪酮與睪酮會和雄激素受體結(jié)合進(jìn)而引起基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞增殖，從而導(dǎo)致前列腺癌的發(fā)生[2]。因此抗雄激素受體成為了治療前列腺癌的主要方向。不僅如此，很早以前就進(jìn)行過關(guān)于雄激素對乳腺癌作用的研究。1958年就有報道每周肌內(nèi)注射150-300mg的丙酸睪丸酮作為臨床治療乳腺癌的方法之一[3]。在二氫睪酮對乳腺癌細(xì)胞株ZR-75-1作用的研究中也發(fā)現(xiàn)了雄激素抑制管腔型乳腺癌細(xì)胞

3、的增殖[4]。然而關(guān)于雄激素對三陰性乳腺癌細(xì)胞株作用的研究卻還在探索階段。本研究旨在觀察不同濃度的丙酸睪丸酮對三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231作用不同時間后的增殖和抑制情況，以及相關(guān)蛋白表達(dá)含量的變化。分析丙酸睪丸酮對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231增殖的作用，并探索其可能的發(fā)生機(jī)制。
　　方法:培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察細(xì)胞的ER、PR、AR、HER-2表達(dá)情況。將培養(yǎng)好的乳腺癌細(xì)胞株接

4、種到96孔板中，分為若干實(shí)驗(yàn)組，并設(shè)一對照組。將濃度為10-4mmol/L至10-12mmol/L的丙酸睪丸酮分別加入不同實(shí)驗(yàn)組中，培養(yǎng)24-72小時后運(yùn)用MTT法檢測細(xì)胞抑制率。從中選取四個作用明顯的濃度。通過流式細(xì)胞儀檢測四個濃度作用下細(xì)胞的Cyclin D1、mTOR和PTEN表達(dá)情況，進(jìn)一步探索丙酸睪丸酮對乳腺癌細(xì)胞蛋白水平的作用機(jī)制。應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　1、通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色法

5、制成的載玻片在倒置顯微鏡下觀察，乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231中ER、PR、HER-2均為陰性表達(dá);AR則為陽性表達(dá)。
　　2、不同濃度丙酸睪丸酮對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231作用不同時間后的影響。
　　2.1通過MTT法檢測同一時間內(nèi)不同濃度丙酸睪丸酮對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231增殖的影響:濃度為10-5mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L、10-11mmol/L的丙酸睪丸酮在24小時對MD

6、A-MB-231細(xì)胞表現(xiàn)為促進(jìn)增殖作用，其增殖率分別為1.86％±1.13％、4.70％±0.59％、7.14％±0.07％、9.26％±1.10％，且濃度越高，增殖作用越弱;在48小時對MDA-MB-231細(xì)胞表現(xiàn)為抑制增殖作用，其抑制率分別為9.73％±2.04％、4.47％±1.17％、1.92％±0.23％、0.35％±0.16％，且濃度越高，抑制作用越明顯;在72小時對MDA-MB-231細(xì)胞也表現(xiàn)為抑制增殖作用，其抑制率分別

7、為17.69％±0.74％、15.41％±0.10％、6.38％±0.23％、1.57％±0.78％，且濃度越高，抑制作用越明顯。統(tǒng)計分析后顯示同一時間內(nèi)不同濃度丙酸睪丸酮對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的增殖率及抑制率均有差異。各組之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　2.2通過MTT法檢測同一濃度的丙酸睪丸酮作用不同時間后對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231增殖的影響:濃度為10-5mmol/L的丙酸睪丸酮對MDA-M

8、B-231細(xì)胞作用24h、48h、72h后的抑制率分別為-1.86％±1.13％、9.73％±2.04％、17.69％±0.74％。10-7mmol/L的抑制率分別為-4.70％±0.59％、4.47％±1.17％、15.41％±0.10％。10-9mmol/L的抑制率分別為-7.14％±0.07％、1.92％±0.23％、6.38％±0.23％。10-11mmol/L的抑制率分別為-9.26％±1.10％、0.35％±0.16％、1.

9、57％±0.78％。且作用時間越長，抑制作用越明顯。統(tǒng)計分析后顯示同一濃度丙酸睪丸酮作用不同時間后對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的增殖率及抑制率均有差異。且各組之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3、不同濃度(10-5mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L、10-11mmol/L)丙酸睪丸酮作用不同時間后的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231中Cyclin D1、mTOR及PTEN蛋白的表達(dá)情況。

10、>　　通過流式細(xì)胞術(shù)檢測到:Cyclin D1蛋白在乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231對照組培養(yǎng)24h、48h及72h后的表達(dá)率分別為99.82％±0.02％、99.90％±0.04％、99.91％±0.04％; mTOR蛋白的表達(dá)率分別為99.63％±0.03％、99.97％±0.02％、99.77％±0.06％; PTEN蛋白的表達(dá)率分別為98.90％±0.06％、98.30％±0.31％、97.35％±0.35％。四種濃度(10-5

11、mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L、10-11mmol/L)的丙酸睪丸酮作用24h后Cyclin D1蛋白與mTOR蛋白的表達(dá)率為99.86％±0.04％、99.90％±0.06％、99.92％±0.05％、99.96％±0.03％;99.78％±0.10％、99.82％±0.11％、99.88％±0.08％、99.92％±0.09％。作用48h后Cyclin D1蛋白與mTOR蛋白的表達(dá)率為99.67％±0.06

12、％、99.74％±0.10％、99.81％±0.11％、99.85％±0.10％;99.68％±0.16％、99.72％±0.15％、99.82％±0.13％、99.93％±0.03％。作用72h后Cyclin D1蛋白與mTOR蛋白的表達(dá)率為99.42％±0.18％、99.66％±0.16％、99.76％±0.12％、99.82％±0.15％;99.41％±0.11％、99.49％±0.15％、99.60％±0.10％、99.65％±

13、0.13％。四種濃度(10-5mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L、10-11mmol/L)的丙酸睪丸酮作用24h后PTEN蛋白的表達(dá)率為98.80％±0.17％、98.76％±0.18％、98.61％±0.33％、96.18％±0.20％。作用48h后PTEN蛋白的表達(dá)率為99.59％±0.20％、99.46％±0.19％、99.42％±0.18％、98.86％±0.13％。作用72h后PTEN蛋白的表達(dá)率為99.

14、76％±0.11％、99.51％±0.14％、98.93％±0.17％、98.46％±0.18％。統(tǒng)計分析后顯示在三個不同時間組內(nèi)不同濃度丙酸睪丸酮作用于乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231后Cyclin D1、mTOR及PTEN蛋白的表達(dá)均有差異，蛋白組內(nèi)各濃度之間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的ER、PR及HER2的表達(dá)均為陰性，AR的表達(dá)為陽性。
　　2、不同

15、濃度(10-5mmol/L、10-7mmol/L、10-9mmol/L、10-11mmol/L)的丙酸睪丸酮對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231作用24小時后有促進(jìn)增殖的作用，且濃度越高，增殖作用越弱。而同樣濃度等級的丙酸睪丸酮對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231作用48、72小時后則表現(xiàn)為抑制作用，且濃度越高，抑制作用越明顯。不僅如此，同一濃度下丙酸睪丸酮作用時間越長，對乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的抑制作用越明顯。
　　3、丙