MTDH基因轉(zhuǎn)染對乳腺癌MDA-MB-231細胞株化療敏感性影響的研究.pdf

1、目的:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率位居我國女性惡性腫瘤之首，且其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，已嚴(yán)重威脅著廣大女性的健康。研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌是一系列原癌基因激活、抑癌基因失活導(dǎo)致的結(jié)果，其侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。
　　MTDH又稱為LYRIC，AEG-1和3D3，是2002年新發(fā)現(xiàn)的多功能原癌基因，在乳腺癌、食管癌、黑色素瘤、肝癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、惡性膠質(zhì)細胞瘤、神經(jīng)母細胞瘤等多種惡性腫瘤中過表達，MTD

2、H的過表達與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5-12]， MTDH基因擴增可以顯著增加乳腺癌細胞的肺轉(zhuǎn)移以及縮短患者的生存時間，運用siRNA敲除MTDH基因可以使乳腺癌細胞中MTDH的表達下降40％，同時乳腺癌患者的肺轉(zhuǎn)移的機率降低80％。此外，MTDH基因的表達增高能夠增強神經(jīng)母細胞瘤非錨定的生長力，同時能夠使惡性腫瘤細胞侵襲能力有所增強，采用siRNA處理能夠使神經(jīng)母細胞瘤浸潤能力明顯被抑制。MTDH能夠?qū)熕幬锂a(chǎn)生耐藥性，

3、抑制MTDH表達可以導(dǎo)致乳腺癌細胞針對化療藥物和應(yīng)激原的敏感性增強，而其高表達能夠?qū)е履[瘤細胞產(chǎn)生耐藥性。以往研究表明，MTDH在惡性腫瘤中表達增高的患者生存期比表達下降患者生存期顯著縮短，并且復(fù)發(fā)率較高，因此提示MTDH的表達高低能夠作為評估惡性腫瘤預(yù)后的一個重要生物學(xué)指標(biāo)。
　　目前的研究主要集中在MTDH的分子特征、作用及其機制上，但是關(guān)于MTDH基因轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細胞前后對化療藥物敏感性的關(guān)系的研究比較少見

4、。本研究旨在測定MTDH基因轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細胞前后乳腺癌細胞中MTDH的mRNA及蛋白表達水平以及轉(zhuǎn)染前后對化療藥物的敏感性，進而判斷MTDH與藥物敏感性之間的關(guān)系，從而尋找一種可以對乳腺癌評估預(yù)后并指導(dǎo)治療的分子生物學(xué)指標(biāo)。
　　方法:將攜帶MTDH基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至DH5α大腸桿菌中進行擴增，并使用脂質(zhì)體法將攜帶高表達MTDH基因的質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染到乳腺癌MDA-MB-231細胞（前期試驗已經(jīng)證明此細胞中MTDH基因

5、最低表達）中，通過realtime PCR，Western Blot方法測定轉(zhuǎn)染前后MTDH的mRNA及蛋白表達水平，鑒定轉(zhuǎn)染效果。轉(zhuǎn)染成功后通過MTT法檢測轉(zhuǎn)染前后乳腺癌MDA-MB-231細胞對1mg/L的阿霉素及8mg/L（兩個濃度均為前期試驗證實過的）的紫杉醇在24h時的藥物敏感性，同時通過流式細胞技術(shù)測定轉(zhuǎn)染前后阿霉素、紫杉醇誘導(dǎo)的細胞凋亡，進一步驗證MTDH與阿霉素、紫杉醇藥物敏感性之間的關(guān)系。以SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析

6、轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞的MTDH表達水平及與藥物敏感性是否存在差異。
　　結(jié)果:
　　1轉(zhuǎn)染前后人乳腺癌細胞MDA-MB-231中MTDH mRNA、蛋白表達水平的檢測
　　通過realtime PCR、Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染0.8ugMTDH基因48小時后乳腺癌細胞中MTDH基因、蛋白表達水平，轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞中mRNA的表達水平分別為1.00±0.00、3.25±0.02，轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞中MTDH的蛋

7、白表達水平分別為0.48±0.07、1.27±0.08，統(tǒng)計分析后顯示，轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞中的MTDH基因、蛋白表達均有差異，兩組之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2轉(zhuǎn)染前后人乳腺癌細胞MDA-MB-231對阿霉素藥物敏感性的檢測
　　通過MTT法檢測1mg/L的阿霉素在24h時對轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞的抑制率:1mg/L的阿霉素在24h時對轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞的抑制率分別為60.72±0.01％、41.68±0.03

8、％。通過流式細胞法檢測1mg/L的阿霉素在24h時對轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞的凋亡率:1mg/L的阿霉素在24h時對轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞的凋亡率分別為39.76±0.44％、20.59±0.59％，統(tǒng)計分析后顯示阿霉素對轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞的抑制率、凋亡率均有差異，兩組之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3轉(zhuǎn)染前后人乳腺癌細胞MDA-MB-231對紫杉醇藥物敏感性的檢測
　　通過MTT法檢測8mg/L的紫杉醇在24h時對轉(zhuǎn)染

9、前后乳腺癌細胞的抑制率:8mg/L的紫杉醇在24h時對轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞的抑制率分別為58±0.38％、40.52±0.03％。通過流式細胞法檢測8mg/L的紫杉醇在24h時對轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞的凋亡率:8mg/L的紫杉醇在24h時對轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞的凋亡率分別為24.88±0.37％、13.97±0.50％，統(tǒng)計分析后顯示紫杉醇對轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細胞的抑制率、凋亡率均有差異，兩組之間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論